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桑树耐旱关联microRNA及其靶基因鉴定与功能分析

摘要第6-8页
Abstract第8-10页
英文缩写第11-23页
第1章 绪论第23-41页
    1.1 植物抗旱性第23-32页
        1.1.1 干旱胁迫及干旱对植物的影响第23-26页
        1.1.2 植物对干旱适应性反应第26-27页
        1.1.3 植物抗旱性评价指标第27-29页
        1.1.4 植物抗旱机制第29-32页
    1.2 植物miRNA的生成、作用机制、抗逆功能及靶基因鉴定第32-36页
        1.2.1 植物miRNA的生成第32-33页
        1.2.2 植物miRNA的作用机制第33-34页
        1.2.3 植物miRNA的抗逆功能第34页
        1.2.4 miRNA及其靶基因的鉴定第34-36页
    1.3 病毒诱导基因沉默(VIGS)技术及应用第36-38页
        1.3.1 VIGS的利用优势第36页
        1.3.2 VIGS的作用机制第36-37页
        1.3.3 VIGS的发现及应用第37-38页
    1.4 本研究的目的和意义第38页
    1.5 本研究的主要内容及方法第38-41页
        1.5.1 研究内容第38-40页
        1.5.2 技术路线第40-41页
第2章 降解组测序鉴定桑树耐旱关联miRNA及其靶基因第41-75页
    2.1 试验材料和试剂第41-45页
        2.1.1 试验材料第41页
        2.1.2 主要试剂第41页
        2.1.3 主要仪器第41-42页
        2.1.4 主要试剂和缓冲液的配制第42页
        2.1.5 引物序列第42-45页
    2.2 试验方法第45-54页
        2.2.1 桑树材料处理第45页
        2.2.2 桑树总RNA的提取第45-46页
        2.2.3 桑树降解组文库的构建第46-47页
        2.2.4 靶基因鉴定及生物信息学分析第47-48页
        2.2.5 qRT-PCR检测干旱胁迫后桑树miRNA及其靶基因的表达变化第48-50页
        2.2.6 miRNA和靶基因间调控网络的构建第50页
        2.2.7 靶基因降解位点的验证第50-54页
    2.3 结果与分析第54-72页
        2.3.1 桑树降解组文库的构建和测序分析第54-57页
        2.3.2 桑树miRNA靶基因的系统鉴定第57-63页
        2.3.3 桑树干旱胁迫关联miRNA及其靶基因的鉴定第63-64页
        2.3.4 靶基因GO功能注释、KEGG代谢通路注释及NR分析第64-66页
        2.3.5 miRNA-target调控网络第66-68页
        2.3.6 干旱胁迫后桑树miRNA及其靶基因的表达变化第68-70页
        2.3.7 靶基因降解位点的RLM-5’RACE验证结果第70-72页
    2.4 讨论第72-75页
第3章 桑树miR166f瞬时转化过表达鉴定其抗旱功能第75-107页
    3.1 试验材料和试剂第75-77页
        3.1.1 试验材料第75页
        3.1.2 主要试剂第75页
        3.1.3 主要仪器第75页
        3.1.4 主要试剂和缓冲液的配制第75-76页
        3.1.5 引物序列第76-77页
    3.2 试验方法第77-87页
        3.2.1 桑树幼苗的培养第77页
        3.2.2 桑树基因组DNA的提取第77-78页
        3.2.3 桑树miR166f前体序列分析、克隆和靶基因鉴定第78-79页
        3.2.4 桑树miR166f过表达重组载体的构建第79-81页
        3.2.5 农杆菌介导桑树miR166f瞬时转化第81-82页
        3.2.6 桑树miR166f过表达瞬时转化效率的检测第82-83页
        3.2.7 桑树miR166f对其靶基因表达水平影响的分析鉴定第83页
        3.2.8 桑树miR166f过表达后抗旱相关生理生化指标的检测分析第83-87页
    3.3 结果与分析第87-103页
        3.3.1 桑树miR166f的生物信息分析及克隆第87-90页
        3.3.2 桑树双元超表达载体的构建第90-91页
        3.3.3 不同条件下重组农杆菌菌液对桑树叶片的转化效率第91-96页
        3.3.4 桑树miR166f过表达对其靶基因表达水平的影响第96-98页
        3.3.5 桑树miR166f过表达对抗旱相关生理生化指标的影响第98-103页
    3.4 讨论第103-107页
第4章 桑树MmSK基因的克隆、表达模式分析及原核表达第107-125页
    4.1 试验材料和试剂第107-109页
        4.1.1 试验材料第107页
        4.1.2 主要试剂第107页
        4.1.3 主要仪器第107页
        4.1.4 主要试剂和缓冲液的配制第107-108页
        4.1.5 引物序列第108-109页
    4.2 试验方法第109-113页
        4.2.1 桑树的胁迫处理第109-110页
        4.2.2 桑树总RNA的提取和cDNA的合成第110页
        4.2.3 桑树MmSK基因cDNA序列的克隆验证第110页
        4.2.4 桑树MmSK基因cDNA序列的生物信息学分析第110-111页
        4.2.5 桑树MmSK基因表达模式分析第111页
        4.2.6 重组MmSK表达载体的构建第111-112页
        4.2.7 桑树MmSK基因的原核诱导表达第112页
        4.2.8 重组MmSK蛋白的SDS-PAGE及WesternBlot鉴定第112-113页
    4.3 结果与分析第113-122页
        4.3.1 桑树MmSK基因的克隆验证第113-114页
        4.3.2 桑树MmSK基因的全长cDNA序列及分析结果第114-115页
        4.3.3 桑树MmSK基因编码氨基酸的同源性与系统进化树分析结果第115-117页
        4.3.4 桑树MmSK基因在不同组织中的表达分析第117-118页
        4.3.5 桑树MmSK基因在不同非生物胁迫下的表达分析第118-120页
        4.3.6 重组表达载体pET-28a(+)-MmSK的构建第120-121页
        4.3.7 MmSK诱导表达及检测结果第121-122页
    4.4 讨论第122-125页
第5章 桑树VIGS体系的建立及MmSK基因抗旱功能鉴定第125-143页
    5.1 试验材料和试剂第125-126页
        5.1.1 试验材料第125页
        5.1.2 主要试剂第125页
        5.1.3 主要仪器第125页
        5.1.4 主要试剂和缓冲液的配制第125-126页
        5.1.5 引物序列第126页
    5.2 试验方法第126-129页
        5.2.1 桑树幼苗的培养第126页
        5.2.2 桑树总RNA的提取和cDNA的合成第126页
        5.2.3 病毒载体pTRV2-PDS的构建第126-127页
        5.2.4 VIGS沉默体系的建立第127-128页
        5.2.5 桑树MmSK基因的VIGS体系构建第128页
        5.2.6 桑树MmSK基因沉默后干旱胁迫下MmSK表达水平检测分析第128页
        5.2.7 桑树MmSK基因沉默后干旱胁迫下桑树理化指标的检测分析第128-129页
    5.3 结果与分析第129-140页
        5.3.1 重组病毒载体pTRV2-PDS及pTRV2-MmSK的构建第129-130页
        5.3.2 MmSK基因沉默效率的检测第130-134页
        5.3.3 MmSK基因沉默后干旱胁迫下MmSK表达水平检测结果第134-135页
        5.3.4 MmSK基因沉默后干旱胁迫下桑树生理生化指标的检测结果第135-140页
    5.4 讨论第140-143页
结论第143-145页
参考文献第145-157页
博士期间学术论文发表情况第157-159页
致谢第159页

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