| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩写 | 第11-23页 |
| 第1章 绪论 | 第23-41页 |
| 1.1 植物抗旱性 | 第23-32页 |
| 1.1.1 干旱胁迫及干旱对植物的影响 | 第23-26页 |
| 1.1.2 植物对干旱适应性反应 | 第26-27页 |
| 1.1.3 植物抗旱性评价指标 | 第27-29页 |
| 1.1.4 植物抗旱机制 | 第29-32页 |
| 1.2 植物miRNA的生成、作用机制、抗逆功能及靶基因鉴定 | 第32-36页 |
| 1.2.1 植物miRNA的生成 | 第32-33页 |
| 1.2.2 植物miRNA的作用机制 | 第33-34页 |
| 1.2.3 植物miRNA的抗逆功能 | 第34页 |
| 1.2.4 miRNA及其靶基因的鉴定 | 第34-36页 |
| 1.3 病毒诱导基因沉默(VIGS)技术及应用 | 第36-38页 |
| 1.3.1 VIGS的利用优势 | 第36页 |
| 1.3.2 VIGS的作用机制 | 第36-37页 |
| 1.3.3 VIGS的发现及应用 | 第37-38页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第38页 |
| 1.5 本研究的主要内容及方法 | 第38-41页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第38-40页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第40-41页 |
| 第2章 降解组测序鉴定桑树耐旱关联miRNA及其靶基因 | 第41-75页 |
| 2.1 试验材料和试剂 | 第41-45页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第41页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 2.1.4 主要试剂和缓冲液的配制 | 第42页 |
| 2.1.5 引物序列 | 第42-45页 |
| 2.2 试验方法 | 第45-54页 |
| 2.2.1 桑树材料处理 | 第45页 |
| 2.2.2 桑树总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.3 桑树降解组文库的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.4 靶基因鉴定及生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 2.2.5 qRT-PCR检测干旱胁迫后桑树miRNA及其靶基因的表达变化 | 第48-50页 |
| 2.2.6 miRNA和靶基因间调控网络的构建 | 第50页 |
| 2.2.7 靶基因降解位点的验证 | 第50-54页 |
| 2.3 结果与分析 | 第54-72页 |
| 2.3.1 桑树降解组文库的构建和测序分析 | 第54-57页 |
| 2.3.2 桑树miRNA靶基因的系统鉴定 | 第57-63页 |
| 2.3.3 桑树干旱胁迫关联miRNA及其靶基因的鉴定 | 第63-64页 |
| 2.3.4 靶基因GO功能注释、KEGG代谢通路注释及NR分析 | 第64-66页 |
| 2.3.5 miRNA-target调控网络 | 第66-68页 |
| 2.3.6 干旱胁迫后桑树miRNA及其靶基因的表达变化 | 第68-70页 |
| 2.3.7 靶基因降解位点的RLM-5’RACE验证结果 | 第70-72页 |
| 2.4 讨论 | 第72-75页 |
| 第3章 桑树miR166f瞬时转化过表达鉴定其抗旱功能 | 第75-107页 |
| 3.1 试验材料和试剂 | 第75-77页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第75页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第75页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第75页 |
| 3.1.4 主要试剂和缓冲液的配制 | 第75-76页 |
| 3.1.5 引物序列 | 第76-77页 |
| 3.2 试验方法 | 第77-87页 |
| 3.2.1 桑树幼苗的培养 | 第77页 |
| 3.2.2 桑树基因组DNA的提取 | 第77-78页 |
| 3.2.3 桑树miR166f前体序列分析、克隆和靶基因鉴定 | 第78-79页 |
| 3.2.4 桑树miR166f过表达重组载体的构建 | 第79-81页 |
| 3.2.5 农杆菌介导桑树miR166f瞬时转化 | 第81-82页 |
| 3.2.6 桑树miR166f过表达瞬时转化效率的检测 | 第82-83页 |
| 3.2.7 桑树miR166f对其靶基因表达水平影响的分析鉴定 | 第83页 |
| 3.2.8 桑树miR166f过表达后抗旱相关生理生化指标的检测分析 | 第83-87页 |
| 3.3 结果与分析 | 第87-103页 |
| 3.3.1 桑树miR166f的生物信息分析及克隆 | 第87-90页 |
| 3.3.2 桑树双元超表达载体的构建 | 第90-91页 |
| 3.3.3 不同条件下重组农杆菌菌液对桑树叶片的转化效率 | 第91-96页 |
| 3.3.4 桑树miR166f过表达对其靶基因表达水平的影响 | 第96-98页 |
| 3.3.5 桑树miR166f过表达对抗旱相关生理生化指标的影响 | 第98-103页 |
| 3.4 讨论 | 第103-107页 |
| 第4章 桑树MmSK基因的克隆、表达模式分析及原核表达 | 第107-125页 |
| 4.1 试验材料和试剂 | 第107-109页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第107页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第107页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第107页 |
| 4.1.4 主要试剂和缓冲液的配制 | 第107-108页 |
| 4.1.5 引物序列 | 第108-109页 |
| 4.2 试验方法 | 第109-113页 |
| 4.2.1 桑树的胁迫处理 | 第109-110页 |
| 4.2.2 桑树总RNA的提取和cDNA的合成 | 第110页 |
| 4.2.3 桑树MmSK基因cDNA序列的克隆验证 | 第110页 |
| 4.2.4 桑树MmSK基因cDNA序列的生物信息学分析 | 第110-111页 |
| 4.2.5 桑树MmSK基因表达模式分析 | 第111页 |
| 4.2.6 重组MmSK表达载体的构建 | 第111-112页 |
| 4.2.7 桑树MmSK基因的原核诱导表达 | 第112页 |
| 4.2.8 重组MmSK蛋白的SDS-PAGE及WesternBlot鉴定 | 第112-113页 |
| 4.3 结果与分析 | 第113-122页 |
| 4.3.1 桑树MmSK基因的克隆验证 | 第113-114页 |
| 4.3.2 桑树MmSK基因的全长cDNA序列及分析结果 | 第114-115页 |
| 4.3.3 桑树MmSK基因编码氨基酸的同源性与系统进化树分析结果 | 第115-117页 |
| 4.3.4 桑树MmSK基因在不同组织中的表达分析 | 第117-118页 |
| 4.3.5 桑树MmSK基因在不同非生物胁迫下的表达分析 | 第118-120页 |
| 4.3.6 重组表达载体pET-28a(+)-MmSK的构建 | 第120-121页 |
| 4.3.7 MmSK诱导表达及检测结果 | 第121-122页 |
| 4.4 讨论 | 第122-125页 |
| 第5章 桑树VIGS体系的建立及MmSK基因抗旱功能鉴定 | 第125-143页 |
| 5.1 试验材料和试剂 | 第125-126页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第125页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第125页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第125页 |
| 5.1.4 主要试剂和缓冲液的配制 | 第125-126页 |
| 5.1.5 引物序列 | 第126页 |
| 5.2 试验方法 | 第126-129页 |
| 5.2.1 桑树幼苗的培养 | 第126页 |
| 5.2.2 桑树总RNA的提取和cDNA的合成 | 第126页 |
| 5.2.3 病毒载体pTRV2-PDS的构建 | 第126-127页 |
| 5.2.4 VIGS沉默体系的建立 | 第127-128页 |
| 5.2.5 桑树MmSK基因的VIGS体系构建 | 第128页 |
| 5.2.6 桑树MmSK基因沉默后干旱胁迫下MmSK表达水平检测分析 | 第128页 |
| 5.2.7 桑树MmSK基因沉默后干旱胁迫下桑树理化指标的检测分析 | 第128-129页 |
| 5.3 结果与分析 | 第129-140页 |
| 5.3.1 重组病毒载体pTRV2-PDS及pTRV2-MmSK的构建 | 第129-130页 |
| 5.3.2 MmSK基因沉默效率的检测 | 第130-134页 |
| 5.3.3 MmSK基因沉默后干旱胁迫下MmSK表达水平检测结果 | 第134-135页 |
| 5.3.4 MmSK基因沉默后干旱胁迫下桑树生理生化指标的检测结果 | 第135-140页 |
| 5.4 讨论 | 第140-143页 |
| 结论 | 第143-145页 |
| 参考文献 | 第145-157页 |
| 博士期间学术论文发表情况 | 第157-159页 |
| 致谢 | 第159页 |
