| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 课题的提出 | 第10页 |
| 1.2 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.2.1 植物低温胁迫研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2.2 柑橘低温胁迫研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.3 miRNA研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.3.1 植物miRNA的生物合成 | 第12-13页 |
| 1.2.3.2 植物miRNA的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.3.3 miRNA与植物逆境胁迫 | 第14-16页 |
| 1.2.3.4 柑橘miRNA研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.4 糖代谢与植物逆境应答 | 第17-18页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 载体及菌株 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-32页 |
| 2.2.1 材料培养与处理 | 第20页 |
| 2.2.2 植物RNA提取及cDNA合成 | 第20-21页 |
| 2.2.3 植物材料相关基因表达模式分析 | 第21-22页 |
| 2.2.4 枳ptr-miR04靶基因预测 | 第22页 |
| 2.2.5 载体构建 | 第22-25页 |
| 2.2.5.1 构建短串联靶标类似物STTM-miR04干涉载体 | 第22-24页 |
| 2.2.5.2 构建瞬时表达载体 | 第24-25页 |
| 2.2.6 大肠杆菌转化及阳性鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.7 重组质粒转化农杆菌 | 第26-27页 |
| 2.2.8 瞬时转化验证ptr-miR04与靶基因互作 | 第27页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的柑橘遗传转化 | 第27-29页 |
| 2.2.9.1 材料准备 | 第27页 |
| 2.2.9.2 遗传转化 | 第27-29页 |
| 2.2.10 转基因植株阳性鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.10.1 DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.10.2 PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.11 生理指标测定 | 第30-31页 |
| 2.2.11.1 相对电导率测定 | 第30页 |
| 2.2.11.2 DAB、NBT染色 | 第30-31页 |
| 2.2.11.3 过氧化氢（H_2O_2）含量、抗超氧阴离子活力（anti-O_2~-）、丙二醛（MDA）含量测定 | 第31页 |
| 2.2.11.4 过氧化物酶（POD）活性、总超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性测定 | 第31页 |
| 2.2.11.5 可溶性总糖、葡萄糖、果糖、蔗糖含量测定 | 第31页 |
| 2.2.12 统计分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-44页 |
| 3.1 烟草T2代转基因植株抗寒性验证 | 第32-35页 |
| 3.1.1 转基因烟草PCR及表达量鉴定 | 第32页 |
| 3.1.2 转基因烟草低温处理表型鉴定 | 第32-34页 |
| 3.1.3 烟草抗寒生理指标测定 | 第34-35页 |
| 3.2 转基因柠檬抗寒性验证 | 第35-38页 |
| 3.2.1 pre-miR04超表达载体转柠檬及植株阳性鉴定 | 第35-37页 |
| 3.2.2 转基因柠檬抗寒性分析 | 第37-38页 |
| 3.3 ptr-miR04靶基因预测及验证 | 第38-40页 |
| 3.3.1 ptr-miR04靶基因预测 | 第38页 |
| 3.3.2 枳基因表达量分析初步验证ptr-miR04靶基因 | 第38-39页 |
| 3.3.3 烟草瞬时表达验证ptr-miR04及靶基因FBA的互作 | 第39-40页 |
| 3.3.4 转基因烟草中pre-miR04与靶基因表达量分析 | 第40页 |
| 3.4 转基因材料糖含量分析 | 第40-42页 |
| 3.4.1 转基因烟草糖含量分析 | 第40-41页 |
| 3.4.2 转基因柠檬糖含量分析 | 第41-42页 |
| 3.5 STTM-miR04干涉载体构建及枳遗传转化 | 第42-44页 |
| 3.5.1 STTM-mi R04干涉载体图 | 第42-43页 |
| 3.5.2 STTM-miR04干涉载体转化枳及转基因植株鉴定 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 ptr-miR04降低植株抗寒能力 | 第44页 |
| 4.2 ptr-miR04可能通过FBA参与到糖代谢途径 | 第44-45页 |
| 4.3 miR04可能参与响应多种逆境胁迫 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| Ⅰ 附表 | 第57-59页 |
| Ⅱ 附图 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
