| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1. 核糖开关 | 第12-15页 |
| 1.1. 核糖开关总述 | 第12-13页 |
| 1.2. 天然核糖开关的发现 | 第13-14页 |
| 1.3. 人工核糖开关的筛选 | 第14-15页 |
| 2. N-乙酰神经氨酸 | 第15-23页 |
| 2.1. N-乙酰神经氨酸概述 | 第15-16页 |
| 2.2. N-乙酰神经氨酸的生物学功能 | 第16页 |
| 2.3. N-乙酰神经氨酸的应用研究 | 第16-18页 |
| 2.4. N-乙酰神经氨酸的生产方法 | 第18-22页 |
| 2.4.1. 酶法催化生产方法 | 第18-20页 |
| 2.4.2. 全细胞生物催化生产方法 | 第20-21页 |
| 2.4.3. 微生物发酵生产方法 | 第21-22页 |
| 2.5. N-乙酰神经氨酸的研究方向 | 第22-23页 |
| 3. 核糖开关在N-乙酰神经氨酸微生物生产中的应用 | 第23-26页 |
| 3.1. 神经氨酸核糖开关的筛选 | 第23-25页 |
| 3.2. 核糖开关在微生物代谢工程领域的应用 | 第25-26页 |
| 4. 本论文的研究内容和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-43页 |
| 1. 实验材料 | 第28-39页 |
| 1.1. 本实验所用的菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 1.2. 本实验所用引物 | 第29-31页 |
| 1.3. 分子生物操作技术常用酶 | 第31页 |
| 1.4. 常用试剂盒 | 第31-32页 |
| 1.5. 常用生化试剂与药品 | 第32页 |
| 1.6. 培养基及实验室常用试剂配方 | 第32-37页 |
| 1.7. 本实验所用抗生素以及其它药品试剂的配方 | 第37页 |
| 1.8. 本实验所用到的仪器和设备 | 第37-39页 |
| 2. 实验方法 | 第39-43页 |
| 2.1. 菌种的保藏方法 | 第39页 |
| 2.2. PCR扩增体系和条件 | 第39-40页 |
| 2.3. 重组PCR方法 | 第40页 |
| 2.4. PCR产物纯化回收(试剂盒方法) | 第40页 |
| 2.5. 限制性内切酶的酶切体系和方法 | 第40-41页 |
| 2.6. T4 DNA连接酶连接反应体系 | 第41页 |
| 2.7. 发酵检测方法 | 第41-42页 |
| 2.7.1. 菌体生长状况检测 | 第41-42页 |
| 2.7.2. 葡萄糖浓度检测 | 第42页 |
| 2.7.3. N-乙酰神经氨酸检测 | 第42页 |
| 2.8. 进化方法 | 第42-43页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第43-66页 |
| 1. N-乙酰神经氨酸核糖开关的重组PCR合成 | 第43-44页 |
| 2. N-乙酰神经氨酸核糖开关的体内功能验证 | 第44-46页 |
| 3. N-乙酰神经氨酸核糖开关筛选体系的构建 | 第46-49页 |
| 4. 进化菌株背景和质粒背景的确立 | 第49-51页 |
| 5. 进化筛选培养基和镍离子筛选浓度的确定 | 第51-58页 |
| 6. N-乙酰神经氨酸核糖开关筛选体系在内源合成的神经氨酸下的功能验证 | 第58-62页 |
| 7. 单质粒进化筛选 | 第62-63页 |
| 8. 双质粒进化筛选 | 第63-66页 |
| 全文总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第76页 |