| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 TLRS介导的天然免疫应答 | 第14-21页 |
| 1.1.1 TLRs的分布及其结构和相应配体 | 第14-17页 |
| 1.1.2 TLRs下游接头蛋白及其信号途径 | 第17-20页 |
| 1.1.3 非TLRs的其他PRRs | 第20-21页 |
| 1.2 犬瘟热病毒(CDV) | 第21-24页 |
| 1.2.1 CDV基本特性 | 第21-22页 |
| 1.2.2 临床特征 | 第22页 |
| 1.2.3 致病性研究 | 第22-24页 |
| 1.3 CDV与天然免疫应答 | 第24-26页 |
| 1.3.1 细胞因子与免疫抑制 | 第24页 |
| 1.3.2 细胞因子与脱髓鞘脑白质炎(DL) | 第24-25页 |
| 1.3.3 IFNs与CDV感染 | 第25-26页 |
| 第二章 CDV感染Mv.1.Lu细胞的蛋白质组学分析 | 第26-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-34页 |
| 2.1.1 细胞与病毒 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.1.4 主要软件 | 第27页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第27页 |
| 2.1.6 病毒预处理 | 第27-28页 |
| 2.1.7 病毒感染Mv.1.Lu细胞的动力学实验 | 第28页 |
| 2.1.8 用于蛋白质组学分析的样品制备 | 第28-29页 |
| 2.1.9 iTRAQ定量 | 第29-31页 |
| 2.1.10 差异蛋白质数据的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.1.11 实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR) | 第32-33页 |
| 2.1.12 WesternBlot实验 | 第33页 |
| 2.1.13 间接免疫荧光实验 | 第33-34页 |
| 2.2 实验结果 | 第34-41页 |
| 2.2.1 CDVPS毒株感染Mv.1.Lu细胞的动力学分析 | 第34-35页 |
| 2.2.2 差异蛋白的鉴定和定量 | 第35-36页 |
| 2.2.3 差异蛋白的亚细胞定位注释 | 第36页 |
| 2.2.4 差异蛋白的GO功能和KEGG通路注释 | 第36-37页 |
| 2.2.5 参与免疫应答过程的差异蛋白的互作网络分析 | 第37-38页 |
| 2.2.6 差异蛋白的验证 | 第38-40页 |
| 2.2.7 CDV感染激活NF-κB信号途径 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-43页 |
| 2.4 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 TLRs对CDV感染诱导的NF-κB激活的影响研究 | 第44-51页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 3.1.1 细胞与病毒 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂及质粒 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 3.1.4 主要软件 | 第44页 |
| 3.1.5 引物的设计与合成 | 第44-45页 |
| 3.1.6 病毒感染及样品收集 | 第45页 |
| 3.1.7 RNA提取,cDNA合成和qRT-PCR实验 | 第45页 |
| 3.1.8 MTT实验 | 第45-46页 |
| 3.1.9 抑制效果检测 | 第46页 |
| 3.1.10 双荧光素酶检测实验 | 第46页 |
| 3.1.11 数据分析 | 第46页 |
| 3.2 结果 | 第46-49页 |
| 3.2.1 CDV感染诱导TLR3,TLR7,TLR8和NF-κBmRNA表达上调 | 第46-47页 |
| 3.2.2 ST2825和TLR3抑制剂的抑制效果分析 | 第47-48页 |
| 3.2.3 TLRs参与了CDV感染诱导的NF-κB的激活 | 第48-49页 |
| 3.3 讨论 | 第49-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 TLR3对CDV复制增殖的影响研究 | 第51-75页 |
| 4.1 材料与方法 | 第51-60页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第51页 |
| 4.1.2 细胞与病毒 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂及抗体 | 第51页 |
| 4.1.4 主要仪器及软件 | 第51-52页 |
| 4.1.5 引物的设计与合成 | 第52页 |
| 4.1.6 水貂脾脏总RNA的提取及cDNA的合成 | 第52-53页 |
| 4.1.7 水貂TLR3基因中间片段的PCR扩增及序列验证 | 第53-54页 |
| 4.1.8 3 ＇RACE和5＇RACEPCR | 第54-56页 |
| 4.1.9 水貂TLR3基因全长序列验证及生物信息学分析 | 第56页 |
| 4.1.10 水貂TLR3基因真核表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| 4.1.11 水貂TLR3基因功能初步分析 | 第57-59页 |
| 4.1.12 病毒感染过表达TLR3的Mv.1.Lu细胞 | 第59页 |
| 4.1.13 TLR3抑制剂实验 | 第59页 |
| 4.1.14 Poly(I:C)刺激实验 | 第59页 |
| 4.1.15 MTT实验 | 第59页 |
| 4.1.16 双荧光素酶实验 | 第59-60页 |
| 4.1.17 间接免疫荧光实验 | 第60页 |
| 4.1.18 WesternBlot实验 | 第60页 |
| 4.1.19 数据分析 | 第60页 |
| 4.2 结果 | 第60-71页 |
| 4.2.1 TLR3基因中间片段PCR扩增及3'RACE和5'RACE扩增 | 第60-61页 |
| 4.2.2 TLR3ORF基因的序列验证 | 第61页 |
| 4.2.3 水貂TLR3基因编码蛋白的信号肽,跨膜区和结构域预测 | 第61-62页 |
| 4.2.4 水貂TLR3基因的序列分析 | 第62-64页 |
| 4.2.5 水貂TLR3基因的序列比对和进化树分析 | 第64-66页 |
| 4.2.6 pCMV-myc-TLR3表达质粒的构建 | 第66页 |
| 4.2.7 pCMV-myc-TLR3的表达分析 | 第66-67页 |
| 4.2.8 pCMV-myc-TLR3的功能初步分析 | 第67页 |
| 4.2.9 过表达TLR3限制CDV复制增殖 | 第67-68页 |
| 4.2.10 抑制TLR3表达促进CDV复制增殖 | 第68-69页 |
| 4.2.11 TLR3促进CDV感染中IFN-β和Mx1的表达 | 第69-70页 |
| 4.2.12 抑制NF-κB激活促进CDV感染和复制 | 第70-71页 |
| 4.3 讨论 | 第71-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-75页 |
| 第五章 全文结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-90页 |
| 附录 | 第90-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
