| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-14页 |
| 材料与方法 | 第14-43页 |
| 一、实验材料 | 第14-23页 |
| 1. 工具酶及分子量Marker | 第14页 |
| 2. 主要生化试剂 | 第14页 |
| 3. 培养基、血清及添加剂 | 第14-15页 |
| 4. 细胞因子 | 第15页 |
| 5. 试剂盒 | 第15页 |
| 6. 同位素标记化合物 | 第15页 |
| 7. 菌株 | 第15页 |
| 8. 质粒 | 第15-19页 |
| 9. 细胞系 | 第19页 |
| 10. 人脐带血标本 | 第19页 |
| 11. 引物、探针及morpholino | 第19-22页 |
| 12. 生物信息学分析软件 | 第22页 |
| 13. 主要仪器及设备 | 第22-23页 |
| 二、实验方法 | 第23-43页 |
| 1. 细胞学实验 | 第23-25页 |
| 1.1 细胞系的诱导 | 第23-24页 |
| 1.2 细胞转染 | 第24页 |
| 1.3 联苯胺染色 | 第24页 |
| 1.4 造血干细胞的体外培养 | 第24-25页 |
| 2. 分子学实验 | 第25-36页 |
| 2.1. Real-time PCR | 第25-27页 |
| 2.2. MiRNA real-time PCR | 第27-28页 |
| 2.3. MiRNA的PAGE及Northern杂交 | 第28-29页 |
| 2.4. 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第29-32页 |
| 2.5. 重组质粒的构建 | 第32页 |
| 2.6. 质粒DNA的提取 | 第32-34页 |
| 2.7. 慢病毒的包装 | 第34页 |
| 2.8. Western blot | 第34-36页 |
| 2.9. 双萤光报告实验 | 第36页 |
| 3. 斑马鱼实验 | 第36-42页 |
| 3.1. 原位杂交(In situ hybridization) | 第36-40页 |
| 3.2. 双重原位杂交(Double in situ hybridization) | 第40-41页 |
| 3.3. O-Dianisidine染色 | 第41-42页 |
| 4. 小鼠实验 | 第42页 |
| 5. MiRNA microarray | 第42-43页 |
| 结果 | 第43-94页 |
| 第一部分 MIR-23a在红系分化过程中的功能及分子机制 | 第43-67页 |
| 1. 表达谱分析筛选受GATA-1正向调控的miRNAs | 第43-45页 |
| 1.1. MiRNA基因芯片表达分析结果 | 第43-44页 |
| 1.2. 筛选在红系分化过程中受GATA-1正向调控的miRNAs | 第44-45页 |
| 2. MiR-23a在红系分化过程中的功能 | 第45-53页 |
| 2.1. MiR-23a在红系分化过程中的表达 | 第45-46页 |
| 2.2. 验证GATA-1对miR-23a的正向调控 | 第46页 |
| 2.3. MiR-23a在K562细胞红系分化中的功能 | 第46-48页 |
| 2.4. CD34+造血干细胞向红系分化过程中miR-23a的功能 | 第48-53页 |
| 3. MiR-23a促进红系分化的分子机制 | 第53-57页 |
| 3.1. MiR-23a成熟序列的同源性分析 | 第53页 |
| 3.2. 验证SHP2是miR-23a的靶基因 | 第53-54页 |
| 3.3. 检测SHP2在红系分化过程中的表达 | 第54-55页 |
| 3.4. CD34+造血干细胞中验证miR-23a靶向抑制SHP2的表达 | 第55-56页 |
| 3.5. Rescue实验证明miR-23a通过抑制SHP2表达促进红系分化 | 第56-57页 |
| 4. SHP2抑制红系分化 | 第57-60页 |
| 4.1. SHP2在K562细胞中的功能 | 第57-59页 |
| 4.2. CD34+造血干细胞中验证SHP2的功能 | 第59-60页 |
| 5. 验证由miR-23a介导的GATA-1负调控SHP2的调节回路 | 第60-62页 |
| 5.1. GATA-1抑制SHP2蛋白水平的表达 | 第60-61页 |
| 5.2. 在CD34+造血干细胞中miR-23a-GATA1-SHP2调节loop进行验证 | 第61-62页 |
| 6. MiR-23a在斑马鱼中的功能验证 | 第62-65页 |
| 6.1. MiR-23a成熟序列在物种中的保守性分析 | 第62页 |
| 6.2. MiR-23a在斑马鱼中的表达 | 第62-63页 |
| 6.3. MiR-23a在斑马鱼中的功能 | 第63-64页 |
| 6.4. 0- Dianisidine染色检测敲低miR-23a后斑马鱼血红蛋白的表达 | 第64页 |
| 6.5. 检测敲低miR-23a抑制斑马鱼初级造血 | 第64页 |
| 6.6. 敲低miR-23a抑制斑马鱼红细胞生成 | 第64-65页 |
| 7. MiR-23a促进小鼠红细胞生成 | 第65-67页 |
| 7.1. 在小鼠中过表达miR-23a | 第65-66页 |
| 7.2. 过表达miR-23a对小鼠造血干细胞向红系分化的影响 | 第66页 |
| 7.3. HE染色检测过表达miR-23a对脾脏红细胞生成的影响 | 第66-67页 |
| 第二部分 MIR-27a/24在红系分化过程中的功能及分子机制 | 第67-94页 |
| 1. MiR-27a/24在红系分化过程中的表达 | 第67-69页 |
| 1.1. K562细胞中miR-27a/24在红系分化过程中的表达 | 第67-68页 |
| 1.2. CD34+造血干细胞中miR-27a/24在红系分化过程中的表达 | 第68-69页 |
| 2. GATA-1转录调节miR-27a/24的表达 | 第69-73页 |
| 2.1. GATA-1在miR-23a/27a/24基因上游promoter区的结合 | 第69-70页 |
| 2.2. GATA-1正向调节miR-27a/24的表达 | 第70-71页 |
| 2.3. GATA-1在w//?-27lf/24基因上游promoterlx.的结合随分化的进行逐渐增强 | 第71-72页 |
| 2.4. 双荧光验证GATA-1对miR-27a/24的正向调节 | 第72-73页 |
| 3. MiR-27a和miR-24在红系分化中的功能 | 第73-82页 |
| 3.1. K562细胞中miR-27a/24对红系分化的影响 | 第73-77页 |
| 3.2. MiR-27a和miR-24对斑马鱼红系分化的影响 | 第77-80页 |
| 3.3. Mir-27a/24对小鼠红细胞生成的影响 | 第80-82页 |
| 4. MiR-27a/24促进红系分化的分子机制 | 第82-94页 |
| 4.1. MiR-27a/24靶向抑制GATA-2的表达 | 第82-85页 |
| 4.2. GATA-1/2 switch调控miR-27a/24的表达 | 第85-91页 |
| 4.3. MiR-27a/24调节GATA-1/2 switch开关形成正反馈调控回路 | 第91-94页 |
| 讨论 | 第94-99页 |
| 小结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-107页 |
| 文献综述 | 第107-118页 |
| 参考文献 | 第114-118页 |
| 英文名词及缩写 | 第118-120页 |
| 攻读博士期间发表的文章 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
