| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 插图和附表清单 | 第9-11页 |
| 常用缩略词和术语表 | 第11-12页 |
| 目录 | 第12-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 卤虫概况 | 第17-21页 |
| 1.2 谷氨酰胺酶(GLS)研究概况 | 第21-22页 |
| 1.3 Prohibitin2(PHB2)研究概况 | 第22-24页 |
| 1.4 自噬相关基因5(Atg5)研究概况 | 第24-25页 |
| 1.5 类Ste20激酶(SLK)研究概况 | 第25-27页 |
| 第二章 卤虫谷氨酰胺酶(Ar-GLS)的分子克隆及表达特征 | 第27-50页 |
| 摘要 | 第27页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2.3 方法 | 第30-42页 |
| 2.3.1 卤虫总RNA的抽提 | 第30-31页 |
| 2.3.2 卤虫cDNA合成 | 第31-32页 |
| 2.3.3 Ar-GLS分子克隆 | 第32-39页 |
| 2.3.4 Ar-GLS蛋白氨基酸序列比对及蛋白进化分析 | 第39页 |
| 2.3.5 Virtual Northern检测 | 第39-42页 |
| 2.4 结果 | 第42-48页 |
| 2.4.1 Ar-GLS分子克隆 | 第42-43页 |
| 2.4.2 Ar-GLS基因序列特征和进化分析 | 第43-46页 |
| 2.4.3 探针的制备 | 第46-47页 |
| 2.4.4 Virtual northern探针效率检测及循环数确定 | 第47页 |
| 2.4.5 Ar-GLS mRNA表达量检测 | 第47-48页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 卤虫Prohibitin2(Ar-PHB2)的分子克隆与表达特征 | 第50-59页 |
| 摘要 | 第50页 |
| 3.1 引言 | 第50-51页 |
| 3.2 材料 | 第51页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第51页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第51页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 卤虫总RNA的抽提 | 第51-52页 |
| 3.3.2 cDNA合成 | 第52页 |
| 3.3.3 Ar-PHB2分子克隆 | 第52页 |
| 3.3.4 Northern Blotting检测 | 第52-54页 |
| 3.4 结果 | 第54-58页 |
| 3.4.1 Ar-PHB2分子克隆 | 第54页 |
| 3.4.2 Ar-PHB2基因的序列特征和进化分析 | 第54-57页 |
| 3.4.3 探针制备及效率检测 | 第57页 |
| 3.4.4 Ar-PHB2基因在休眠胚胎形成和孵化过程中的表达 | 第57-58页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 卤虫自噬相关基因5(Ar-Atg5)的分子克隆 | 第59-63页 |
| 摘要 | 第59页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料 | 第59-60页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第60页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第60页 |
| 4.3 实验方法 | 第60-61页 |
| 4.3.1 卤虫总RNA的抽提 | 第60页 |
| 4.3.2 cDNA合成 | 第60页 |
| 4.3.3 Ar-Atg5分子克隆 | 第60-61页 |
| 4.4 结果 | 第61-62页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 卤虫谷氨酰胺酶(Ar-GLS)在休眠胚胎形成过程中的功能研究 | 第63-77页 |
| 摘要 | 第63页 |
| 5.1 引言 | 第63-64页 |
| 5.2 材料 | 第64页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第64页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第64页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第64页 |
| 5.3 实验方法 | 第64-71页 |
| 5.3.1 表达质粒的构建 | 第65-67页 |
| 5.3.2 Ar-GLS ORF体外表达 | 第67页 |
| 5.3.3 变性条件下蛋白纯化 | 第67-69页 |
| 5.3.4 Western blotting检测 | 第69-71页 |
| 5.3.5 抑制剂处理 | 第71页 |
| 5.4 结果 | 第71-75页 |
| 5.4.1 体外表达载体构建 | 第71-72页 |
| 5.4.2 Ar-GLS蛋白体外表达与纯化 | 第72-73页 |
| 5.4.3 Ar-GLS抗体工作浓度的确定 | 第73-74页 |
| 5.4.4 Ar-GLS蛋白表达水平检测 | 第74页 |
| 5.4.5 Ar-GLS抑制剂对卤虫胚胎重新发育的影响 | 第74-75页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 卤虫类Ste20激酶(Ar-SLK)的分子克隆与功能研究 | 第77-91页 |
| 摘要 | 第77页 |
| 6.1 引言 | 第77-78页 |
| 6.2 材料 | 第78-79页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第78页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第78页 |
| 6.2.3 实验仪器 | 第78-79页 |
| 6.3 实验方法 | 第79-82页 |
| 6.3.1 荧光定量PCR | 第79页 |
| 6.3.2 细胞核质分离 | 第79-80页 |
| 6.3.3 RNA干涉(RNAi) | 第80-81页 |
| 6.3.4 Western Blotting检测 | 第81页 |
| 6.3.5 RNA干涉后无节幼体抗胁迫能力检测 | 第81-82页 |
| 6.4 结果 | 第82-90页 |
| 6.4.1 Ar-SLK分子克隆和蛋白表达特征 | 第82-85页 |
| 6.4.2 Ar-SLK在卵胎生途径中的亚细胞定位 | 第85-86页 |
| 6.4.3 Ar-SLK双链RNA制备 | 第86-87页 |
| 6.4.4 Ar-SLK干涉效率检测 | 第87-88页 |
| 6.4.5 Ar-SLK干涉后无节幼体抵胁迫能力检测 | 第88-90页 |
| 6.5 小结与讨论 | 第90-91页 |
| 第七章 结论与展望 | 第91-92页 |
| 7.1 结论 | 第91页 |
| 7.2 展望 | 第91-92页 |
| 研究创新点 | 第92-93页 |
| References | 第93-97页 |
| 附表1 基因引物序列表 | 第97-99页 |
| 附录1 常用试剂配制 | 第99-105页 |
| 附录2 作者简历 | 第105页 |
