| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 字母缩写 | 第14-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1.1 人类线粒体疾病概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 人类线粒体基因组(mtDNA)特点 | 第15-16页 |
| 1.1.2 人类线粒体疾病分子机制 | 第16-17页 |
| 1.1.3 人类线粒体病的临床特点 | 第17-18页 |
| 1.2 模式生物斑马鱼 | 第18-26页 |
| 1.2.1 模式生物物斑马鱼的起源 | 第18-20页 |
| 1.2.2 斑马鱼分子生物学技术 | 第20-23页 |
| 1.2.3 人类线粒体疾病斑马鱼模型 | 第23-26页 |
| 1.3 tRNA修饰蛋白GTPBP3家族 | 第26-28页 |
| 第2章 实验材料 | 第28-36页 |
| 2.1 实验质粒 | 第28页 |
| 2.2 实验菌株和斑马鱼 | 第28-29页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5α | 第28页 |
| 2.2.2 酵母菌株 | 第28-29页 |
| 2.2.3 斑马鱼品系 | 第29页 |
| 2.3 实验试剂和仪器 | 第29-36页 |
| 2.3.1 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.3.2 实验试剂的配制 | 第30-35页 |
| 2.3.3 试剂盒 | 第35页 |
| 2.3.4 实验仪器 | 第35-36页 |
| 第3章 实验方法 | 第36-58页 |
| 3.1 斑马鱼gtpbp3基因的生物信息学预测和克隆 | 第36-43页 |
| 3.1.1 斑马鱼gtpbp3的生物信息学预测 | 第36页 |
| 3.1.2 斑马鱼gtpbp3 cDNA克隆 | 第36-40页 |
| 3.1.3 相关质粒的构建 | 第40-42页 |
| 3.1.4 酵母菌株的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 斑马鱼gtpbp3的表达分析 | 第43-48页 |
| 3.2.1 时间表达Western分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 组织特异性表达整体原位杂交分析 | 第45-47页 |
| 3.2.3 组织特异性表达整体免疫荧光分析 | 第47-48页 |
| 3.2.4 成鱼器官特异性表达qRT-PCR分析 | 第48页 |
| 3.3 斑马鱼Gtpbp3在酵母中亚细胞定位和回复表达 | 第48-50页 |
| 3.3.1 斑马鱼Gtpbp3在酵母中亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 3.3.2 酵母菌株的生长状态分析 | 第49-50页 |
| 3.4 MOs和RNA注射 | 第50-52页 |
| 3.4.1 mRNA合成 | 第50-51页 |
| 3.4.2 Guide RNA合成 | 第51页 |
| 3.4.3 斑马鱼鱼卵显微注射 | 第51-52页 |
| 3.5 Gtpbp3 Morphants表型分析 | 第52-54页 |
| 3.5.1 Splice MOs敲低验证 | 第52-53页 |
| 3.5.2 Gtpbp3 Morphants胚胎、器官发育分析 | 第53页 |
| 3.5.3 gtpbp3 mRNA拯救Gtpbp3 Morphants | 第53-54页 |
| 3.6 Gtpbp3 Morphants生化分析 | 第54-56页 |
| 3.6.1 Gtpbp3 Morphants转录水平分析 | 第54-55页 |
| 3.6.2 Gtpbp3 Morphants斑马鱼ATP生成分析 | 第55-56页 |
| 3.6.3 Gtpbp3 Morphants斑马鱼ROS分析 | 第56页 |
| 3.6.4 Gtpbp3 Morphants斑马鱼凋亡分析 | 第56页 |
| 3.7 转基因及基因敲除斑马鱼的构建 | 第56-58页 |
| 3.7.1 gtpbp3基因敲除型斑马鱼构建 | 第56-57页 |
| 3.7.2 gtpbp3转基因型斑马鱼构建 | 第57页 |
| 3.7.3 荧光标记线粒体斑马鱼(MitoFish)的构建 | 第57-58页 |
| 第4章 实验结果和讨论 | 第58-74页 |
| 4.1 斑马鱼gtpbp3基因的生物信息学预测和克隆 | 第58-61页 |
| 4.1.1 斑马鱼gtpbp3基因克隆 | 第58页 |
| 4.1.2 斑马鱼Gtpbp3蛋白结构预测 | 第58-59页 |
| 4.1.3 斑马鱼相互作用的基因 | 第59-60页 |
| 4.1.4 斑马鱼Gtpbp3的进化树构建 | 第60-61页 |
| 4.2 斑马鱼Gtpbp3的表达分析 | 第61-64页 |
| 4.2.1 斑马鱼Gtpbp3时间表达分析结果 | 第61-62页 |
| 4.2.2 斑马鱼Gtpbp3组织特异性表达分析结果 | 第62-64页 |
| 4.3 斑马鱼Gtpbp3在酵母中亚细胞定位和回复表达分析 | 第64-65页 |
| 4.3.1 斑马鱼Gtpbp3在酵母中亚细胞定位结果 | 第64页 |
| 4.3.2 斑马鱼Gtpbp3在呼吸缺陷型酵母回复表达结果 | 第64-65页 |
| 4.4 Gtpbp3 Morphants表型和生化分析 | 第65-71页 |
| 4.4.1 SP MOs敲低鉴定结果 | 第65-66页 |
| 4.4.2 Gtpbp3缺陷对斑马鱼胚胎和器官发育影响 | 第66-68页 |
| 4.4.3 gtpbp3 mRNA拯救Gtpbp3 Morphants结果 | 第68页 |
| 4.4.4 Gtpbp3 Morphants线粒体转录水平分析 | 第68-69页 |
| 4.4.5 Gtpbp3 Morphants能量代谢分析 | 第69-70页 |
| 4.4.6 Gtpbp3 Morphants ROS及凋亡分析 | 第70-71页 |
| 4.5 gtpbp3敲除型斑马鱼的构建 | 第71-72页 |
| 4.6 讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 作者简介 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
