中文摘要 | 第1-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
1 前言 | 第14-37页 |
·植物泛素/265 蛋白酶降解途径 | 第14-20页 |
·泛素(Ubiquitin, Ub) | 第14-16页 |
·泛素降解途径中的关键酶及其功能 | 第16-20页 |
·E1(泛素激活酶) | 第16页 |
·E2(泛素结合酶) | 第16页 |
·E3(泛素连接酶) | 第16-19页 |
·去泛素化酶 | 第19页 |
·26S 蛋白酶体 | 第19-20页 |
·植物中F-box 蛋白的研究进展 | 第20-28页 |
·F-box 蛋白的发现 | 第20页 |
·F-box 蛋白的结构和分类 | 第20-21页 |
·植物F-box 蛋白的功能 | 第21-28页 |
·泛素/265 蛋白酶体与激素应答 | 第21-24页 |
·在植物生长发育过程中的作用 | 第24-25页 |
·在不同外界环境刺激和胁迫中的作用 | 第25-28页 |
·RING finger 型E3 在植物中的研究进展 | 第28-31页 |
·RING finger 的结构 | 第28-29页 |
·RING finger 型蛋白的研究进展 | 第29-31页 |
·植物抗旱分子机理研究概况 | 第31-36页 |
·干旱胁迫诱导蛋白的表达与植物的抗旱性 | 第31-33页 |
·植物对干旱胁迫信号的感应和传导 | 第33-34页 |
·干旱胁迫应答基因 | 第34-36页 |
·功能性相关基因 | 第34-35页 |
·调控相关基因 | 第35-36页 |
·本研究的目的与意义 | 第36-37页 |
2 材料与方法 | 第37-72页 |
·材料 | 第37-43页 |
·植物材料 | 第37页 |
·植物材料培养与处理 | 第37页 |
·载体与菌株 | 第37页 |
·其它材料 | 第37-38页 |
·实验引物 | 第38-40页 |
·软件和网络资源 | 第40-43页 |
·实验方法 | 第43-72页 |
·RNA 的提取 | 第43-45页 |
·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第43页 |
·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第43-44页 |
·CTAB 法提取植物总RNA | 第44-45页 |
·RNA 的纯化 | 第45页 |
·cDNA 第一条链的合成 | 第45-46页 |
·双链cDNA的合成 | 第46页 |
·双链文库DNA 的纯化 | 第46页 |
·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第46-47页 |
·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第47页 |
·大肠杆菌细胞的转化 | 第47-48页 |
·质粒DNA 的提取 | 第48-49页 |
·凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第49页 |
·序列测定 | 第49页 |
·AtPP2-811及LEA14基因cDNA全长的获得 | 第49-50页 |
·半定量RT-PCR | 第50-51页 |
·实时荧光定量PCR 分析 | 第51页 |
·GUS 活性测定 | 第51-52页 |
·植物转化 | 第52-54页 |
·植物超表达载体的构建 | 第52-53页 |
·农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第53页 |
·农杆菌的培养 | 第53-54页 |
·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第54页 |
·转基因拟南芥的鉴定 | 第54页 |
·酵母双杂交 | 第54-66页 |
·双分子荧光互补实验表达载体构建 | 第66页 |
·本生烟草叶片瞬时转化 | 第66-68页 |
·Clustal 的使用 | 第68-69页 |
·Phylip 系统发育树 | 第69-70页 |
·Mega4.1 构建系统发生树的方法 | 第70页 |
·本地BLAST 方法 | 第70页 |
·苹果中RING finger 蛋白的鉴定 | 第70-71页 |
·序列比对及进化树分析 | 第71页 |
·RING finger 蛋白中其他结构域的鉴定 | 第71-72页 |
3 结果与分析 | 第72-100页 |
·F-box蛋白的鉴定与功能分析 | 第72-83页 |
·拟南芥中1488 个E3 的生物信息学分析 | 第72-73页 |
·31 个E3 基因的干旱诱导表达分析 | 第73-75页 |
·AtPP2-811 上游的DRE 元件在干旱诱导中的作用 | 第75页 |
·超表达AtPP2-811 减弱了拟南芥的干旱抗性 | 第75-78页 |
·干旱响应基因在WT 和超表达株系中的表达 | 第78-80页 |
·酵母双杂交筛选AtPP2-811 的互作蛋白 | 第80-81页 |
·AtPP2-811 与LEA14 的相互作用 | 第81-83页 |
·RING finger 蛋白的生物信息学分析 | 第83-100页 |
·苹果中RING finger 型结构域的鉴定 | 第83页 |
·苹果中RING finger 型蛋白的结构特征 | 第83-85页 |
·RING finger 结构中其他的保守氨基酸位点 | 第85-86页 |
·苹果RING 结构域中各配体间的氨基酸数目 | 第86-88页 |
·RING 结构域的进化分析及RING finger 蛋白中的其他结构域 | 第88-89页 |
·RING finger 基因的染色体定位 | 第89-98页 |
·RING finger 蛋白与苹果果实发育 | 第98-100页 |
4 讨论 | 第100-104页 |
5 结论 | 第104-105页 |
参考文献 | 第105-120页 |
致谢 | 第120-121页 |
攻读学位期间发表的论文及成果 | 第121页 |