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拟南芥F-box基因AtPP2-B11的功能分析及苹果RING finger型泛素连接酶E3的家族分析

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-14页
1 前言第14-37页
   ·植物泛素/265 蛋白酶降解途径第14-20页
     ·泛素(Ubiquitin, Ub)第14-16页
     ·泛素降解途径中的关键酶及其功能第16-20页
       ·E1(泛素激活酶)第16页
       ·E2(泛素结合酶)第16页
       ·E3(泛素连接酶)第16-19页
       ·去泛素化酶第19页
       ·26S 蛋白酶体第19-20页
   ·植物中F-box 蛋白的研究进展第20-28页
     ·F-box 蛋白的发现第20页
     ·F-box 蛋白的结构和分类第20-21页
     ·植物F-box 蛋白的功能第21-28页
       ·泛素/265 蛋白酶体与激素应答第21-24页
       ·在植物生长发育过程中的作用第24-25页
       ·在不同外界环境刺激和胁迫中的作用第25-28页
   ·RING finger 型E3 在植物中的研究进展第28-31页
     ·RING finger 的结构第28-29页
     ·RING finger 型蛋白的研究进展第29-31页
   ·植物抗旱分子机理研究概况第31-36页
     ·干旱胁迫诱导蛋白的表达与植物的抗旱性第31-33页
     ·植物对干旱胁迫信号的感应和传导第33-34页
     ·干旱胁迫应答基因第34-36页
       ·功能性相关基因第34-35页
       ·调控相关基因第35-36页
   ·本研究的目的与意义第36-37页
2 材料与方法第37-72页
   ·材料第37-43页
     ·植物材料第37页
     ·植物材料培养与处理第37页
     ·载体与菌株第37页
     ·其它材料第37-38页
     ·实验引物第38-40页
     ·软件和网络资源第40-43页
   ·实验方法第43-72页
     ·RNA 的提取第43-45页
       ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA第43页
       ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA第43-44页
       ·CTAB 法提取植物总RNA第44-45页
     ·RNA 的纯化第45页
     ·cDNA 第一条链的合成第45-46页
     ·双链cDNA的合成第46页
     ·双链文库DNA 的纯化第46页
     ·DNA 片段与克隆载体的连接第46-47页
     ·大肠杆菌DH5α感受态的制备第47页
     ·大肠杆菌细胞的转化第47-48页
     ·质粒DNA 的提取第48-49页
     ·凝胶电泳中DNA片段的回收第49页
     ·序列测定第49页
     ·AtPP2-811及LEA14基因cDNA全长的获得第49-50页
     ·半定量RT-PCR第50-51页
     ·实时荧光定量PCR 分析第51页
     ·GUS 活性测定第51-52页
     ·植物转化第52-54页
       ·植物超表达载体的构建第52-53页
       ·农杆菌感受态细胞的制备及转化第53页
       ·农杆菌的培养第53-54页
       ·农杆菌介导的拟南芥转化第54页
       ·转基因拟南芥的鉴定第54页
     ·酵母双杂交第54-66页
     ·双分子荧光互补实验表达载体构建第66页
     ·本生烟草叶片瞬时转化第66-68页
     ·Clustal 的使用第68-69页
     ·Phylip 系统发育树第69-70页
     ·Mega4.1 构建系统发生树的方法第70页
     ·本地BLAST 方法第70页
     ·苹果中RING finger 蛋白的鉴定第70-71页
     ·序列比对及进化树分析第71页
     ·RING finger 蛋白中其他结构域的鉴定第71-72页
3 结果与分析第72-100页
   ·F-box蛋白的鉴定与功能分析第72-83页
     ·拟南芥中1488 个E3 的生物信息学分析第72-73页
     ·31 个E3 基因的干旱诱导表达分析第73-75页
     ·AtPP2-811 上游的DRE 元件在干旱诱导中的作用第75页
     ·超表达AtPP2-811 减弱了拟南芥的干旱抗性第75-78页
     ·干旱响应基因在WT 和超表达株系中的表达第78-80页
     ·酵母双杂交筛选AtPP2-811 的互作蛋白第80-81页
     ·AtPP2-811 与LEA14 的相互作用第81-83页
   ·RING finger 蛋白的生物信息学分析第83-100页
     ·苹果中RING finger 型结构域的鉴定第83页
     ·苹果中RING finger 型蛋白的结构特征第83-85页
     ·RING finger 结构中其他的保守氨基酸位点第85-86页
     ·苹果RING 结构域中各配体间的氨基酸数目第86-88页
     ·RING 结构域的进化分析及RING finger 蛋白中的其他结构域第88-89页
     ·RING finger 基因的染色体定位第89-98页
     ·RING finger 蛋白与苹果果实发育第98-100页
4 讨论第100-104页
5 结论第104-105页
参考文献第105-120页
致谢第120-121页
攻读学位期间发表的论文及成果第121页

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