| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 DUBs分类及序列结构特征 | 第12-14页 |
| 1.2 DUBs具有广泛的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.3 OTU蛋白的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.1 真核细胞中OTU蛋白的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.2 病毒中OTU蛋白的功能 | 第17页 |
| 1.4 水稻条纹病毒(RSV)OTU-like蛋白 | 第17-20页 |
| 1.4.1 水稻条纹病 | 第17-18页 |
| 1.4.2 水稻条纹病毒(RSV) | 第18-19页 |
| 1.4.3 RSV OTU-like蛋白 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 毒源 | 第22页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 TRIzol法提取水稻病株总RNA | 第23页 |
| 2.2.2 RNA逆转录 | 第23-24页 |
| 2.2.3 PCR | 第24-25页 |
| 2.2.4 DNA片段纯化 | 第25页 |
| 2.2.5 连接 | 第25-26页 |
| 2.2.5.1 目的片段与T载体连接 | 第25-26页 |
| 2.2.5.2 目的片段与表达载体连接 | 第26页 |
| 2.2.6 感受态细胞制备 | 第26-27页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第26-27页 |
| 2.2.6.2 酵母菌感受态细胞制备 | 第27页 |
| 2.2.6.3 根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第27页 |
| 2.2.7 转化 | 第27-29页 |
| 2.2.7.1 大肠杆菌的转化 | 第27-28页 |
| 2.2.7.2 酵母转化 | 第28页 |
| 2.2.7.3 农杆菌转化 | 第28-29页 |
| 2.2.8 质粒抽提 | 第29-30页 |
| 2.2.8.1 大肠杆菌质粒抽提 | 第29页 |
| 2.2.8.2 酵母质粒抽提 | 第29-30页 |
| 2.2.9 双酶切 | 第30-31页 |
| 2.2.10 测序与序列比对 | 第31页 |
| 2.2.11 诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21表达 | 第31页 |
| 2.2.12 蛋白提取 | 第31-32页 |
| 2.2.12.1 液氮冻融法小量提取蛋白质 | 第31页 |
| 2.2.12.2 大量提取与纯化蛋白质 | 第31-32页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE | 第32-33页 |
| 2.2.14 抗血清的制备 | 第33页 |
| 2.2.15 Western-Blot | 第33-34页 |
| 2.2.16 农杆菌浸润烟草 | 第34-35页 |
| 2.2.17 DAPI细胞核染色 | 第35页 |
| 2.2.18 TRV重组载体构建 | 第35-38页 |
| 第3章 RSV OTU-like蛋白分段表达 | 第38-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-40页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第38-39页 |
| 3.1.2 表达载体构建 | 第39页 |
| 3.1.3 诱导表达 | 第39页 |
| 3.1.4 融合蛋白的提取与纯化 | 第39页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE胶电泳 | 第39页 |
| 3.1.6 Western-Blot | 第39-40页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第40-46页 |
| 3.2.1 引物设计与载体构建 | 第40-42页 |
| 3.2.2 融合蛋白的诱导表达和检测 | 第42页 |
| 3.2.3 抗血清制备及其特异性分析 | 第42-46页 |
| 第4章 与RSV OTU-like蛋白互作的水稻基因筛选 | 第46-56页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 4.1.1 菌株、质粒 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 4.1.3 载体构建 | 第47页 |
| 4.1.4 酵母转化 | 第47页 |
| 4.1.5 Yeast Mating筛选水稻cDNA文库 | 第47-48页 |
| 4.1.6 含互作基因的质粒提取、测序及基因序列分析 | 第48页 |
| 4.2 结果 | 第48-54页 |
| 4.2.1 引物设计与诱饵载体构建 | 第48-49页 |
| 4.2.2 重组诱饵质粒毒性检测 | 第49-50页 |
| 4.2.3 重组诱饵质粒自激活活性分析 | 第50-51页 |
| 4.2.4 RSV OTU-like蛋白自身互作分析 | 第51-52页 |
| 4.2.5 与RSV OTU-like蛋白互作的水稻基因筛选及互作验证 | 第52-53页 |
| 4.2.6 水稻基因序列分析 | 第53-54页 |
| 4.3 讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 RSV OTU-like蛋白与LHCP在植物细胞中的互作 | 第56-66页 |
| 5.1 材料与方法 | 第57-58页 |
| 5.1.1 植物、质粒、菌株 | 第57页 |
| 5.1.2 载体构建 | 第57页 |
| 5.1.3 农杆菌转化及浸润 | 第57页 |
| 5.1.4 DAPI染色 | 第57页 |
| 5.1.5 荧光观察 | 第57-58页 |
| 5.2 结果 | 第58-64页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第58-59页 |
| 5.2.2 LHCP基因扩增 | 第59页 |
| 5.2.3 载体构建 | 第59-60页 |
| 5.2.4 RSV OTU-like蛋白与LHCP在植物体内的互作 | 第60-61页 |
| 5.2.5 RSV OTU-like蛋白亚细胞定位分析 | 第61-62页 |
| 5.2.6 LHCP基因沉默分析 | 第62-64页 |
| 5.3 讨论 | 第64-66页 |
| 第6章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 6.1 主要结论 | 第66页 |
| 6.2 创新之处 | 第66页 |
| 6.3 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录一 缩略词表 | 第76-77页 |
| 附录二 主要试剂及配方 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
