| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 农杆菌介导的小麦成熟胚转化体系的优化 | 第10-27页 |
| 1 引言 | 第10-12页 |
| 2 材料和方法 | 第12-17页 |
| 2.1 小麦成熟胚遗传转化体系的优化 | 第12-13页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第12页 |
| 2.1.2 农杆菌菌株和质粒 | 第12页 |
| 2.1.3 试验过程中使用的培养基 | 第12页 |
| 2.1.4 试验方法 | 第12-13页 |
| 2.2 小麦转基因植株的检测 | 第13-17页 |
| 2.2.1 转化植株的 GUS 活性测定 | 第13-14页 |
| 2.2.2 GUS 基因转化植株的 PCR 检测 | 第14-15页 |
| 2.2.3 T1 代转基因植株的 RT-PCR 检测 | 第15-17页 |
| 3 结果与分析 | 第17-24页 |
| 3.1 小麦成熟胚遗传转化体系的优化 | 第17-22页 |
| 3.1.1 不同培养基和 2,4-D 浓度对小麦品种 5389 成熟胚出愈率的影响 | 第17-18页 |
| 3.1.2 不同诱导培养时间愈伤组织再生和组织褐化的影响 | 第18-19页 |
| 3.1.3 不同激素配比对愈伤组织分化再生的影响 | 第19-20页 |
| 3.1.4 不同共培养时间对愈伤组织分化再生的影响 | 第20页 |
| 3.1.5 不同浓度抗氧化剂 Vc 对再生的影响 | 第20-21页 |
| 3.1.6 头孢霉素（Cef）和特美汀（Timentin）对小麦愈伤分化再生的影响 | 第21-22页 |
| 3.2 小麦转基因植株的检测 | 第22-24页 |
| 3.2.1 GUS 活性测定及分子水平检测 | 第22页 |
| 3.2.2 T0 代植株 GUS 基因的 PCR 检测 | 第22-23页 |
| 3.2.3 T1 代转基因植株 GUS 基因的 RT-PCR 检测 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24-27页 |
| 4.1 影响成熟胚愈伤组织形成的因素 | 第24页 |
| 4.2 影响愈伤组织再生的因素 | 第24-25页 |
| 4.3 组织褐化对愈伤组织再生的影响 | 第25页 |
| 4.4 转化植株的分子检测 | 第25-27页 |
| 第二章 小麦TaATG8 基因超表达和RNAi 载体的构建及遗传转化 | 第27-48页 |
| 1 引言 | 第27-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-37页 |
| 2.1 TaATG8 超表达植物表达载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.1.1 载体质粒、菌株、酶 | 第29页 |
| 2.1.2 RNA 的提取 | 第29页 |
| 2.1.3 反转录 | 第29页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.1.5 TaATG8 的 PCR 扩增 | 第30页 |
| 2.1.6 PCR 产物回收 | 第30页 |
| 2.1.7 CaCl2法制备大肠杆菌 DH5α的感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.1.8 PCR 产物与克隆载体的连接和转化 | 第31页 |
| 2.1.9 阳性克隆的蓝白斑筛选 | 第31页 |
| 2.1.10 质粒提取 | 第31页 |
| 2.1.11 双元表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.1.12 重组载体的鉴定 | 第32页 |
| 2.1.13 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| 2.2 TaATG8 基因 RNAi 植物表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.1 载体质粒、菌株、酶 | 第33页 |
| 2.2.2 TaATG8 基因 RNAi 表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3 TaATG8-GFP 亚细胞定位载体的构建 | 第34页 |
| 2.4 TaATG8-GFP 注射烟草瞬时表达后检测 | 第34-35页 |
| 2.4.1 试剂和载体质粒 | 第34页 |
| 2.4.2 操作步骤 | 第34-35页 |
| 2.4.3 GFP 荧光蛋白信号的 Confocal 检测 | 第35页 |
| 2.5 农杆菌介导的 TaATG8 超表达和 RNAi 植物表达载体的遗传转化 | 第35-37页 |
| 2.5.1 植物材料 | 第35页 |
| 2.5.2 试验方法 | 第35页 |
| 2.5.3 转化植株的分子检测 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-46页 |
| 3.1 TaATG8 基因全长的超表达载体构建 | 第37-38页 |
| 3.1.1 TaATG8 目的片段的获得 | 第37页 |
| 3.1.2 双元表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.3 pCAMBIA3301-35S::TaATG8 的农杆菌转化 | 第38页 |
| 3.2 TaATG8 基因 RNAi 载体构建 | 第38-41页 |
| 3.2.1 TaATG8 正反向目的片段的获得 | 第38-39页 |
| 3.2.2 pTCK303-Ubi::TaATG8 载体的构建及农杆菌转化 | 第39-41页 |
| 3.3 TaATG8 亚细胞定位载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.1 获得 TaATG8 片段（去终止子）并与 eGFP 中间载体连接 | 第41页 |
| 3.3.2 PCR 扩增 TaATG8-eGFP 融合片段 | 第41-42页 |
| 3.3.3 TaATG8-eGFP 融合片段连接至载体 pCAMBIA3301 | 第42页 |
| 3.3.4 GFP 荧光蛋白信号的 Confocal 观察 | 第42-43页 |
| 3.4 TaATG8 基因超表达转化植株的 PCR 检测 | 第43-44页 |
| 3.5 TaATG8 基因 RNAi 载体转化植株的 PCR 检测 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
