| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语表 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-36页 |
| 1.1 梨轮纹病和干腐病的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.1.1 梨轮纹病和干腐病病原学研究 | 第19-20页 |
| 1.1.2 B. dothidea诱导寄主表现轮纹和干腐症状的机理 | 第20页 |
| 1.1.3 梨轮纹病和干腐病的防治 | 第20-21页 |
| 1.2 侵染我国果树的葡萄座腔菌科真菌的种类多样性 | 第21-22页 |
| 1.3 真菌病毒 | 第22-35页 |
| 1.3.1 真菌病毒的分类 | 第24-29页 |
| 1.3.2 真菌病毒的传播 | 第29-30页 |
| 1.3.3 影响病毒传播效率的因素 | 第30页 |
| 1.3.4 真菌病毒和病原真菌互作研究 | 第30-31页 |
| 1.3.5 真菌病毒和弱毒现象 | 第31页 |
| 1.3.6 其它能导致弱毒现象的真菌病毒 | 第31-32页 |
| 1.3.7 真菌病毒在生物防治上的应用潜力 | 第32-35页 |
| 1.4 侵染木本真菌的真菌病毒研究进展 | 第35页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 第二章 梨轮纹病菌和干腐病菌菌株的分离和致病性测定 | 第36-61页 |
| 2.1 引言 | 第36-37页 |
| 2.2 试验材料 | 第37页 |
| 2.3 试验方法 | 第37-45页 |
| 2.3.1 病菌分离和纯化 | 第37-40页 |
| 2.3.2 菌落形态的观察 | 第40页 |
| 2.3.3 分生孢子的诱导 | 第40页 |
| 2.3.4 菌株DNA的提取 | 第40页 |
| 2.3.5 引物设计与合成 | 第40-41页 |
| 2.3.6 PCR扩增 | 第41-42页 |
| 2.3.7 PCR产物的回收与纯化 | 第42页 |
| 2.3.8 连接 | 第42-43页 |
| 2.3.9 热击转化 | 第43页 |
| 2.3.10 阳性克隆的PCR鉴定 | 第43页 |
| 2.3.11 阳性克隆测序和系统进化树分析 | 第43-44页 |
| 2.3.12 不同菌株致病性的测定 | 第44-45页 |
| 2.4 结果与分析 | 第45-58页 |
| 2.4.1 田间症状观察 | 第45-46页 |
| 2.4.2 病原菌的形态学鉴定 | 第46-49页 |
| 2.4.3 病原菌的分子鉴定 | 第49-52页 |
| 2.4.4 病原菌的致病性分析 | 第52-58页 |
| 2.5 讨论 | 第58-61页 |
| 第三章 葡萄座腔菌不同菌株中dsRNA病毒的检测 | 第61-69页 |
| 3.1 引言 | 第61页 |
| 3.2 试验材料 | 第61页 |
| 3.3 试验方法 | 第61-65页 |
| 3.3.1 葡萄座腔菌菌株的分离 | 第61-62页 |
| 3.3.2 DNA提取 | 第62页 |
| 3.3.3 dsRNA提取 | 第62-64页 |
| 3.3.4 核酸电泳分析 | 第64页 |
| 3.3.5 用DNase I和S1核酸酶处理dsRNA样品 | 第64-65页 |
| 3.4 结果和分析 | 第65-68页 |
| 3.4.1 菌株的表型 | 第65-66页 |
| 3.4.2 菌落异常菌株的致病力 | 第66页 |
| 3.4.3 供试菌株DNA和dsRNA的提取结果 | 第66-68页 |
| 3.5 讨论 | 第68-69页 |
| 第四章 五节段dsRNA病毒BdRV1分子特性及生物学特性研究 | 第69-131页 |
| 4.1 引言 | 第69-70页 |
| 4.2 试验材料 | 第70-71页 |
| 4.2.1 供试菌株 | 第70-71页 |
| 4.2.2 供试植物 | 第71页 |
| 4.3 试验方法 | 第71-90页 |
| 4.3.1 菌落形态观察、生长速率及致病力测定 | 第71-72页 |
| 4.3.2 DsRNA病毒全长cDNA克隆 | 第72-78页 |
| 4.3.3 DsRNA片段cDNA序列的拼接及分析 | 第78页 |
| 4.3.4 菌株YZN115单分生孢子后代的分离 | 第78-79页 |
| 4.3.5 菌株YZN115的弱毒特性及dsRNA的水平传染 | 第79页 |
| 4.3.6 病毒粒子的提取 | 第79-80页 |
| 4.3.7 病毒粒体的透射电镜观察 | 第80页 |
| 4.3.8 病毒粒体的核酸和结构蛋白的检测 | 第80-82页 |
| 4.3.9 原生质体的制备 | 第82页 |
| 4.3.10 病毒粒体的转染 | 第82-83页 |
| 4.3.11 原生质体再生法对病毒的脱除 | 第83页 |
| 4.3.12 原核表达载体的构建和蛋白诱导表达 | 第83-84页 |
| 4.3.13 表达蛋白的可溶性分析 | 第84-85页 |
| 4.3.14 His标签蛋白的纯化 | 第85-86页 |
| 4.3.15 His标签蛋白换缓冲液和浓度的测定 | 第86页 |
| 4.3.16 多克隆抗体的制备 | 第86页 |
| 4.3.17 真菌总蛋白的提取 | 第86-87页 |
| 4.3.18 Western blot分析 | 第87页 |
| 4.3.19 真菌中病毒粗提液的小量制备 | 第87-88页 |
| 4.3.20 间接ELISA | 第88页 |
| 4.3.21 免疫捕捉RT-PCR（IC-RT-PCR） | 第88-89页 |
| 4.3.22 免疫电镜 | 第89-90页 |
| 4.3.23 数据的统计方法 | 第90页 |
| 4.4 结果与分析 | 第90-126页 |
| 4.4.1 葡萄座腔菌菌株YZN115的生物学特性及dsRNA的检测 | 第90-92页 |
| 4.4.2 dsRNA片段的全长cDNA序列的分析 | 第92-102页 |
| 4.4.3 BdRV1的垂直传播 | 第102-103页 |
| 4.4.4 BdRV1的水平传播 | 第103-104页 |
| 4.4.5 水平传毒试验中亲本菌株和衍生菌株的区分 | 第104页 |
| 4.4.6 传毒衍生菌株表现畸形生长和弱毒特性 | 第104-108页 |
| 4.4.7 BdRV1在不同来源B. dothidea菌株中的分布和序列多态性 | 第108-109页 |
| 4.4.8 从纯化的BdRV1/YZN115样品中获得病毒的dsRNA和蛋白 | 第109-111页 |
| 4.4.9 BdRV1的dsRNA4蛋白全基因序列的获得和原核表达载体构建 | 第111-112页 |
| 4.4.10 多克隆抗体PAb-p4的效价分析 | 第112-113页 |
| 4.4.11 多克隆抗体PAb-p4识别BdRV1编码的蛋白 | 第113-115页 |
| 4.4.12 病毒的结构 | 第115页 |
| 4.4.13 多克隆抗体的IC-RT-PCR分析及对BdRV1/YZN115病毒的识别 | 第115-116页 |
| 4.4.14 BdRV1的转录组数据统计 | 第116-119页 |
| 4.4.15 转录组序列GO和KEGG分析 | 第119页 |
| 4.4.16 差异表达基因的筛选及功能分类 | 第119-126页 |
| 4.5 讨论 | 第126-131页 |
| 第五章 双节段dsRNA病毒BdBRV1分子特性和生物学特性研究 | 第131-148页 |
| 5.1 引言 | 第131页 |
| 5.2 试验材料 | 第131-132页 |
| 5.2.1 供试菌株 | 第131页 |
| 5.2.2 供试植物 | 第131-132页 |
| 5.3 试验方法 | 第132-133页 |
| 5.3.1 菌株生物学特性 | 第132页 |
| 5.3.2 DsRNA提取和纯化 | 第132页 |
| 5.3.3 BdBRV1全长cDNA的克隆 | 第132页 |
| 5.3.4 PCR产物测序 | 第132页 |
| 5.3.5 DsRNA片段cDNA序列的拼接及分析 | 第132页 |
| 5.3.6 BdBRV1病毒粒子特征 | 第132页 |
| 5.3.7 BdBRV1的水平和垂直传播 | 第132-133页 |
| 5.4 结果和分析 | 第133-145页 |
| 5.4.1 菌株EW220的生物学特性及dsRNA的检测 | 第133-135页 |
| 5.4.2 BdBRV1的基因结构和特性分析 | 第135-139页 |
| 5.4.3 BdBRV1病毒粒体的负染观察及核酸、结构蛋白的检测 | 第139-141页 |
| 5.4.4 BdBRV1病毒的系统进化分析 | 第141页 |
| 5.4.5 BdBRV1病毒垂直传播能力 | 第141页 |
| 5.4.6 BdBRV1病毒的水平传播能力 | 第141-143页 |
| 5.4.7 BdBRV1病毒的生物学特征 | 第143-145页 |
| 5.5 讨论 | 第145-148页 |
| 第六章 一种侵染梨轮纹病菌的全病毒基因组的分析 | 第148-156页 |
| 6.1 引言 | 第148页 |
| 6.2 试验材料 | 第148页 |
| 6.2.1 供试菌株 | 第148页 |
| 6.2.2 供试植物 | 第148页 |
| 6.3 试验方法 | 第148-150页 |
| 6.4 结果和分析 | 第150-155页 |
| 6.4.1 菌株GY25的生物学特性及dsRNA的检测 | 第150页 |
| 6.4.2 BdV1的基因结构和特性分析 | 第150-151页 |
| 6.4.3 BdV1的的系统进化分析 | 第151-155页 |
| 6.5 讨论 | 第155-156页 |
| 第七章 全文结论和展望 | 第156-160页 |
| 7.1 结论和展望 | 第156-158页 |
| 7.2 创新点 | 第158-160页 |
| 参考文献 | 第160-183页 |
| 附录1 多克隆抗体效价测定 | 第183-184页 |
| 附录2 p MD18-T克隆载体图谱 | 第184-185页 |
| 附录3 p ET-28a(+)载体图谱和多克隆位点信息 | 第185-186页 |
| 附录4 常用试剂和培养基的配方 | 第186-190页 |
| 附录5 博士期间发表论文 | 第190-192页 |
| 致谢 | 第192-194页 |
