| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-33页 |
| 1.1 昆虫的化学感受器及感受识别机制 | 第16-18页 |
| 1.1.1 昆虫的化学感受器 | 第16-17页 |
| 1.1.2 昆虫感受气味物质的分子机制 | 第17-18页 |
| 1.2 昆虫嗅觉相关蛋白研究进展 | 第18-29页 |
| 1.2.1 气味结合蛋白 | 第18-23页 |
| 1.2.2 化学感受蛋白 | 第23-25页 |
| 1.2.3 气味受体 | 第25-28页 |
| 1.2.4 离子受体 | 第28页 |
| 1.2.5 气味降解酶 | 第28-29页 |
| 1.3 梨小食心虫化学通讯信息物质 | 第29-31页 |
| 1.3.1 梨小食心虫性信息素 | 第29-30页 |
| 1.3.2 梨小食心虫主要寄主植物挥发物 | 第30-31页 |
| 1.4 本研究的思路 | 第31-33页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第31-32页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第32-33页 |
| 第二章 梨小食心虫触角转录组测序及嗅觉相关基因鉴定 | 第33-63页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-38页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第33-34页 |
| 2.1.2 触角总RNA提取 | 第34页 |
| 2.1.3 cDNA文库构建和转录组测序 | 第34-35页 |
| 2.1.4 触角转录组生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.1.5 嗅觉相关基因鉴定 | 第35-36页 |
| 2.1.6 嗅觉相关基因表达量分析 | 第36页 |
| 2.1.7 序列比对 | 第36-37页 |
| 2.1.8 气味结合蛋白和化学感受蛋白基因的组织表达分析 | 第37-38页 |
| 2.2 结果与分析 | 第38-59页 |
| 2.2.1 触角总RNA质量分析 | 第38-40页 |
| 2.2.2 转录组测序及序列组装 | 第40页 |
| 2.2.3 触角转录组Unigenes与其他昆虫的同源比对 | 第40-42页 |
| 2.2.4 触角Unigenes功能注释 | 第42页 |
| 2.2.5 Unigenes eggNOG分析 | 第42-44页 |
| 2.2.6 嗅觉相关基因在触角中的表达量 | 第44页 |
| 2.2.7 气味结合蛋白基因的鉴定及组织表达分析 | 第44-49页 |
| 2.2.8 化学感受蛋白基因的鉴定及组织表达分析 | 第49-53页 |
| 2.2.9 气味受体基因的鉴定 | 第53-56页 |
| 2.2.10 离子受体基因的鉴定 | 第56-57页 |
| 2.2.11 感觉神经元膜蛋白及气味降解酶基因的鉴定 | 第57-59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-63页 |
| 第三章 梨小食心虫气味结合蛋白和化学感受蛋白的原核表达与蛋白纯化 | 第63-81页 |
| 3.1 试验材料 | 第63-64页 |
| 3.1.1 供试昆虫饲养 | 第63页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 3.2 试验方法 | 第64-70页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第64页 |
| 3.2.2 气味结合蛋白和化学感受蛋白编码区扩增 | 第64-66页 |
| 3.2.3 表达载体构建 | 第66-68页 |
| 3.2.4 蛋白纯化 | 第68-69页 |
| 3.2.5 蛋白定量 | 第69页 |
| 3.2.6 表达产物SDS-PAGE检测 | 第69-70页 |
| 3.3 结果与分析 | 第70-79页 |
| 3.3.1 触角总RNA提取 | 第70-71页 |
| 3.3.2 GmolOBPs和Gmol CSPs CDS扩增 | 第71-73页 |
| 3.3.3 GmolOBPs和Gmol CSPs去信号肽CDS序列扩增 | 第73-74页 |
| 3.3.4 融合表达载体构建 | 第74-76页 |
| 3.3.5 GmolOBPs和Gmol CSPs诱导表达 | 第76-78页 |
| 3.3.6 蛋白浓度测定 | 第78-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-81页 |
| 第四章 梨小食心虫气味结合蛋白和化学感受蛋白的结合特性分析 | 第81-102页 |
| 4.1 材料与方法 | 第82-84页 |
| 4.1.1 蛋白样品 | 第82页 |
| 4.1.2 所用试剂 | 第82页 |
| 4.1.3 所用仪器 | 第82页 |
| 4.1.4 蛋白样品与荧光探针 1-NPN的结合 | 第82-84页 |
| 4.1.5 气味配体的荧光竞争结合 | 第84页 |
| 4.2 结果与分析 | 第84-100页 |
| 4.2.1 重组蛋白与探针 1-NPN的饱和荧光效应 | 第84-85页 |
| 4.2.2 重组蛋白与 1-NPN结合常数测定 | 第85-86页 |
| 4.2.3 气味配体的竞争结合试验 | 第86-100页 |
| 4.3 讨论 | 第100-102页 |
| 第五章 GmolGOBP2和GmolOBP8的免疫定位和特异性结合位点研究 | 第102-121页 |
| 5.1 试验材料与方法 | 第103-107页 |
| 5.1.1 免疫定位 | 第103-104页 |
| 5.1.2 GmolGOBP2和GmolOBP8的同源建模 | 第104页 |
| 5.1.3 GmolGOBP2和GmolOBP8与气味分子的柔性对接 | 第104-105页 |
| 5.1.4 定点突变基因的克隆 | 第105-106页 |
| 5.1.5 突变体的原核表达与蛋白纯化 | 第106页 |
| 5.1.6 pH值对重组蛋白结合能力的影响 | 第106页 |
| 5.1.7 突变蛋白与关键配体结合能力测定 | 第106-107页 |
| 5.2 结果与分析 | 第107-119页 |
| 5.2.1 GmolGOBP2和GmolOBP8在触角感器中的分布 | 第107页 |
| 5.2.2 GmolGOBP2和GmolOBP8的三维结构模型 | 第107-109页 |
| 5.2.3 GmolGOBP2和GmolOBP8的功能位点预测 | 第109-112页 |
| 5.2.4 突变基因的克隆 | 第112-114页 |
| 5.2.5 突变体的原核表达及蛋白纯化 | 第114-115页 |
| 5.2.6 pH值对重组蛋白结合能力的影响 | 第115-116页 |
| 5.2.7 突变蛋白结合能力测定 | 第116-119页 |
| 5.3 讨论 | 第119-121页 |
| 第六章 梨小食心虫对挥发物的触角电位反应和行为反应 | 第121-128页 |
| 6.1 材料与方法 | 第121-123页 |
| 6.1.1 材料 | 第121-122页 |
| 6.1.2 方法 | 第122-123页 |
| 6.2 结果与分析 | 第123-126页 |
| 6.2.1 触角电位反应 | 第123页 |
| 6.2.2 行为反应 | 第123-126页 |
| 6.3 讨论 | 第126-128页 |
| 第七章 梨小食心虫谷胱甘肽S转移酶GmolGST1的克隆、表达及功能分析 | 第128-141页 |
| 7.1 材料与方法 | 第128-131页 |
| 7.1.1 材料 | 第128-129页 |
| 7.1.2 方法 | 第129-131页 |
| 7.2 结果与分析 | 第131-139页 |
| 7.2.1 GmolGST1序列分析 | 第131页 |
| 7.2.2 GmolGST1进化树分析 | 第131-132页 |
| 7.2.3 GmolGST1与昆虫delta亚家族GSTs多序列比对分析 | 第132-133页 |
| 7.2.4 GmolGST1结构特征分析 | 第133-135页 |
| 7.2.5 GmolGST1的原核表达和蛋白纯化 | 第135页 |
| 7.2.6 GmolGST1酶学特性及活力测定 | 第135-136页 |
| 7.2.7 杀虫剂对GmolGST1活性的抑制 | 第136-138页 |
| 7.2.8 GmolGST1对气味分子的降解能力 | 第138页 |
| 7.2.9 Gmol GST1 对气味分子的降解能力 | 第138-139页 |
| 7.3 讨论 | 第139-141页 |
| 第八章 全文总结 | 第141-145页 |
| 参考文献 | 第145-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 个人简介 | 第164页 |
