| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 绪论 | 第18-44页 |
| 1.1 水稻白叶枯病(Bacterial blight,BB)的研究进展 | 第18-28页 |
| 1.1.1 水稻白叶枯病 | 第18-19页 |
| 1.1.2 白叶枯病菌致病基因的研究 | 第19-20页 |
| 1.1.3 水稻抗白叶枯病基因的研究 | 第20-26页 |
| 1.1.4 水稻-白叶枯病互作的研究 | 第26-28页 |
| 1.2 后基因组学技术在水稻白叶枯病研究中的应用进展 | 第28-33页 |
| 1.2.1 转录组学 | 第29-30页 |
| 1.2.2蛋白质组学 | 第30-32页 |
| 1.2.3 外分泌蛋白质组学 | 第32页 |
| 1.2.4 代谢组学 | 第32-33页 |
| 1.3 水稻对白叶枯病菌的主要防御机制 | 第33-35页 |
| 1.3.1 触发病原相关分子模式触发的免疫反应 | 第33-34页 |
| 1.3.2 效应因子激活的免疫反应 | 第34-35页 |
| 1.3.3 磷酸激酶及转录因子 | 第35页 |
| 1.4 疣粒野生稻的研究进展 | 第35-39页 |
| 1.4.1 同源序列克隆法寻找疣粒野生稻白叶枯病抗性基因 | 第36页 |
| 1.4.2 差减文库法筛选疣粒野生稻白叶枯病抗性基因 | 第36-37页 |
| 1.4.3 疣粒野生稻外分泌蛋白质组分析 | 第37页 |
| 1.4.4 体细胞不对称杂交转移疣粒野生稻高抗白叶枯病抗性 | 第37页 |
| 1.4.5 携带疣粒野生稻白叶枯病抗性的SH76水稻蛋白质组学分析 | 第37-38页 |
| 1.4.6 携带疣粒野生稻白叶枯病抗性的Y73水稻转录组学分析 | 第38页 |
| 1.4.7 活性氧和一氧化氮在疣粒野生稻中的迸发 | 第38页 |
| 1.4.8 图位克隆法精细定位疣粒野生稻白叶枯病抗性基因 | 第38-39页 |
| 1.5 本研究目的与思路 | 第39-44页 |
| 1.5.1 本研究的目的与意义 | 第39-41页 |
| 1.5.2 设计思路 | 第41-44页 |
| 第2章 疣粒野生稻部分外分泌蛋白质的转录分析 | 第44-54页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 2.1.1 植物材料与白叶枯病菌 | 第44页 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 | 第44-45页 |
| 2.1.3 qRT-PCR引物设计 | 第45-46页 |
| 2.1.4 水稻种子催芽、移植与接菌 | 第46页 |
| 2.1.5 水稻叶片总RNA的提取(TRIzol法) | 第46-47页 |
| 2.1.6 总RNA残留DNA的去除 | 第47页 |
| 2.1.7 第一链cDNA的合成 | 第47-48页 |
| 2.1.8 qRT-PCR | 第48页 |
| 2.2 实验结果 | 第48-50页 |
| 2.2.1 半定量结果 | 第48-50页 |
| 2.2.2 定量结果 | 第50页 |
| 2.2.3 过氧化物酶在抗感水稻中的表达分析 | 第50页 |
| 2.3 讨论 | 第50-54页 |
| 第3章 3个疣粒野生稻外分泌蛋白功能的初步研究 | 第54-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第54-70页 |
| 3.1.1 植物材料与白叶枯病菌 | 第54页 |
| 3.1.2 供试菌株与质粒载体 | 第54-55页 |
| 3.1.3 分子生物学试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 基因在水稻不同组织中的表达特征分析 | 第55页 |
| 3.1.5 激素处理和环境胁迫处理 | 第55-56页 |
| 3.1.6 基因克隆与载体构建 | 第56-59页 |
| 3.1.7 转化 | 第59-62页 |
| 3.1.8 质粒抽提 | 第62-63页 |
| 3.1.9 带有目的基因的入门载体pX2E-T与靶标载体的重组 | 第63页 |
| 3.1.10 根癌农杆菌介导的水稻成熟胚遗传转化 | 第63-66页 |
| 3.1.11 转基因水稻的分子生物学检测 | 第66-67页 |
| 3.1.12 转基因水稻植株的抗病性分析 | 第67页 |
| 3.1.13 PR基因在转基因水稻中的表达分析 | 第67页 |
| 3.1.14 SA及JA途径关键基因在转基因水稻中的表达分析 | 第67-68页 |
| 3.1.15 OmCS1基因在水稻原生质体中的定位观察 | 第68-70页 |
| 3.2 实验结果 | 第70-81页 |
| 3.2.1 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8的基因序列及蛋白序列分析 | 第70-71页 |
| 3.2.2 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8在不同组织中的表达量 | 第71页 |
| 3.2.3 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8基因的诱导表达特征 | 第71-72页 |
| 3.2.4 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8表达载体的构建 | 第72页 |
| 3.2.5 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8转基因植株的获得 | 第72-75页 |
| 3.2.6 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8转基因植株的表型观察 | 第75-76页 |
| 3.2.7 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8在转基因植株中的表达分析 | 第76-77页 |
| 3.2.8 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8转基因株系中PR基因的表达 | 第77-78页 |
| 3.2.9 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8转基因株系中SA与JA信号途径关键基因的表达分析 | 第78页 |
| 3.2.10 OmCS1、OsPOP11及OmSCP8转基因株系对白叶枯病菌抗性的分析 | 第78-79页 |
| 3.2.11 OmCS1的细胞亚定位 | 第79-81页 |
| 3.3 讨论 | 第81-82页 |
| 第4章 疣粒野生稻凝集素R40c1蛋白功能的初步研究 | 第82-106页 |
| 4.1 材料与方法 | 第82-89页 |
| 4.1.1 植物材料与白叶枯病菌 | 第82页 |
| 4.1.2 供试菌株与质粒载体 | 第82页 |
| 4.1.3 分子生物学试剂 | 第82页 |
| 4.1.4 基因在水稻不同组织中的表达特征分析 | 第82-83页 |
| 4.1.5 激素处理和环境胁迫处理 | 第83页 |
| 4.1.6 OmR40c1与5'UTR+OmR40c1的克隆及其载体构建 | 第83页 |
| 4.1.7 根癌农杆菌介导水稻遗传转化 | 第83页 |
| 4.1.8 OmR40c1与5'UTR+OmR40c1转基因水稻的分子生物学检测 | 第83-84页 |
| 4.1.9 OmR40c1与5'UTR+OmR40c1转基因水稻株系的抗病性分析 | 第84页 |
| 4.1.10 PR基因在转基因水稻中的表达分析 | 第84页 |
| 4.1.11 JA和SA途径关键基因在转基因水稻中的表达分析 | 第84页 |
| 4.1.12 OmR40c1与5'UTR+OmR40c1转基因水稻耐盐性分析 | 第84-85页 |
| 4.1.13 OmR40c1转基因水稻生理生化指标的测定 | 第85页 |
| 4.1.14 OmR40c1转基因水稻中Na~+、K~+离子的测定 | 第85页 |
| 4.1.15 OmR40c1在烟草细胞中亚细胞定位 | 第85-86页 |
| 4.1.16 OmR40c1蛋白的原核表达 | 第86-88页 |
| 4.1.17 OmR40c1蛋白的血凝试验分析 | 第88页 |
| 4.1.18 OmR40c1蛋白与白叶枯病菌总蛋白的Pμll-Down实验 | 第88-89页 |
| 4.2 实验结果 | 第89-103页 |
| 4.2.1 OmR40c1在不同组织中的表达量 | 第89-90页 |
| 4.2.2 OmR40c1基因的诱导表达特征 | 第90页 |
| 4.2.3 OmR40c1的基因序列及蛋白序列分析 | 第90-91页 |
| 4.2.4 OmR40c1和5'UTR+OmR40c1转基因植株的获得 | 第91-92页 |
| 4.2.5 OmR40c1和5'UTR+OmR40c1转基因植株的表型观察 | 第92-93页 |
| 4.2.6 OmR40c1和5'UTR+OmR40c1转基因植株RT-PCR检测 | 第93页 |
| 4.2.7 转基因株系中PR基因的表达 | 第93-94页 |
| 4.2.8 转基因株系中SA与JA信号途径关键基因的表达分析 | 第94-95页 |
| 4.2.9 转基因株系对白叶枯病菌抗性的影响 | 第95页 |
| 4.2.10 转OmR40c1水稻的耐盐性鉴定 | 第95-96页 |
| 4.2.11 盐胁迫下转OmR40c1水稻的生理指标分析 | 第96-97页 |
| 4.2.12 盐胁迫下转OmR40c1水稻的Na~+、K~+测定 | 第97-99页 |
| 4.2.13 OmR40c1基因的亚细胞定位 | 第99页 |
| 4.2.14 OmR40c1蛋白的原核表达 | 第99-100页 |
| 4.2.15 OmR40c1蛋白的蛋白印迹验证及纯化 | 第100-102页 |
| 4.2.16 OmR40c1蛋白与兔血红细胞的血凝试验 | 第102页 |
| 4.2.17 OmR40c1蛋白与白叶枯病菌总蛋白的Pμll down及质谱鉴定 | 第102-103页 |
| 4.3 讨论 | 第103-106页 |
| 第5章 白叶枯病菌胁迫下感病水稻悬浮细胞外分泌蛋白质组的分析研究 | 第106-131页 |
| 5.1 材料与方法 | 第106-119页 |
| 5.1.1 材料 | 第106页 |
| 5.1.2 菌株及载体 | 第106页 |
| 5.1.3 分子生物学试剂 | 第106-107页 |
| 5.1.4 水稻悬浮细胞体系的建立 | 第107页 |
| 5.1.5 水稻Xoo的培养和保存 | 第107页 |
| 5.1.6 水稻悬浮细胞培养液的收集 | 第107-108页 |
| 5.1.7 水稻外分泌蛋白的提取 | 第108页 |
| 5.1.8 水稻外分泌蛋白的纯化及定量 | 第108-110页 |
| 5.1.9 荧光双向电泳(DIGE) | 第110页 |
| 5.1.10 荧光双向电泳 | 第110-112页 |
| 5.1.11 图像扫描及分析 | 第112-113页 |
| 5.1.12 差异蛋白点的质谱鉴定 | 第113-114页 |
| 5.1.13 外分泌蛋白的预测分析 | 第114页 |
| 5.1.14 外分泌蛋白在转录水平上的RT-PCR分析 | 第114-115页 |
| 5.1.15 白叶枯病菌蛋白的定位观察 | 第115-117页 |
| 5.1.16 pHMXoo-3654(pHMX2)致病性的研究 | 第117-119页 |
| 5.2 实验结果 | 第119-122页 |
| 5.2.1 DIGE及质谱鉴定结果 | 第119页 |
| 5.2.2 质谱鉴定的差异外分泌蛋白的生物学分析 | 第119-121页 |
| 5.2.3 响应Xoo胁迫的日本晴外分泌蛋白的转录水平分析 | 第121页 |
| 5.2.4 3个白叶枯病菌蛋白的细胞亚定位 | 第121-122页 |
| 5.2.5 Xoo-3654的超表达、对菌生长的影响及其致病性的研究 | 第122页 |
| 5.3 讨论 | 第122-131页 |
| 5.3.1 外分泌防御蛋白 | 第128-129页 |
| 5.3.2 细胞壁修饰蛋白 | 第129页 |
| 5.3.3 氧化还原蛋白 | 第129页 |
| 5.3.4 Xoo外分泌蛋白 | 第129-131页 |
| 第6章 栽培稻和疣粒野生稻中CHIT16等位基因功能的初步研究 | 第131-146页 |
| 6.1 材料与方法 | 第131-134页 |
| 6.1.1 植物材料与白叶枯病菌 | 第131页 |
| 6.1.2 供试菌株与质粒载体 | 第131页 |
| 6.1.3 分子生物学试剂 | 第131页 |
| 6.1.4 基因在水稻不同组织中的表达特征分析 | 第131页 |
| 6.1.5 激素处理和环境胁迫处理 | 第131-132页 |
| 6.1.6 OsCHIT16及OmCHIT16基因的克隆 | 第132页 |
| 6.1.7 入门载体PX2E-T的构建 | 第132页 |
| 6.1.8 携带目的基因的入门载体pX2E-T与靶标载体的重组 | 第132页 |
| 6.1.9 根癌农杆菌介导的水稻成熟胚遗传转化 | 第132页 |
| 6.1.10 转基因水稻的分子生物学检测 | 第132-133页 |
| 6.1.11 转基因水稻植株的抗病性分析 | 第133页 |
| 6.1.12 PR基因在转基因水稻中的表达分析 | 第133页 |
| 6.1.13 SA及JA途径关键基因在转基因水稻中的表达分析 | 第133页 |
| 6.1.14 OmCHIT16及OsCHIT16定位载体的构建与转染 | 第133-134页 |
| 6.2 实验结果 | 第134-142页 |
| 6.2.1 OsCHIT16基因在根、茎及叶中的表达 | 第134页 |
| 6.2.2 OsCHIT16基因的诱导表达特征 | 第134-135页 |
| 6.2.3 OsCHIT16与OmCHIT16的基因序列及蛋白序列的分析比较 | 第135-136页 |
| 6.2.4 OsCHITl6与OmCHITl6转基因水稻阳性鉴定及表型观察 | 第136-137页 |
| 6.2.5 OsCHIT16与OmCHIT16转基因水稻材料T1株系表型观察 | 第137页 |
| 6.2.6 OsCHIT16与OmCHIT16转基因水稻表达量分析 | 第137-139页 |
| 6.2.7 PR基因在转基因材料申的表达 | 第139-140页 |
| 6.2.8 SA及JA信号途径关键基因在转基因材料中的表达分析 | 第140页 |
| 6.2.9 转基因株系的抗病分析 | 第140-142页 |
| 6.2.10 OmCHIT16及OsCHIT16的亚细胞定位分析 | 第142页 |
| 6.3 讨论 | 第142-146页 |
| 第7章 总结及展望 | 第146-149页 |
| 7.1 结论 | 第146-147页 |
| 7.1.1 白叶枯病菌胁迫下日本晴悬浮细胞外分泌蛋白组的变化分析 | 第146页 |
| 7.1.2 质谱鉴定的差异表达蛋白转录水平分析 | 第146-147页 |
| 7.1.3 转基因水稻 | 第147页 |
| 7.2 下一步工作展望 | 第147-148页 |
| 7.2.1 白叶枯病菌3个基因的敲除 | 第147页 |
| 7.2.2 水稻4个基因的RNAi干涉 | 第147-148页 |
| 7.3 创新点 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-158页 |
| 附录A：缩略词及中英文对照 | 第158-160页 |
| 附录B：常用培养基及缓冲液配方 | 第160-167页 |
| 附录C：常用试剂和仪器 | 第167-168页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第168-169页 |
| 致谢 | 第169-171页 |
| 作者简介 | 第171-172页 |
