| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 课题的提出 | 第13页 |
| 1.2 植物体细胞胚发生的研究进展 | 第13-23页 |
| 1.2.1 植物体细胞胚发生及其意义 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物体细胞胚发生方式 | 第14-16页 |
| 1.2.2.1 无融合生殖 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 胚外胚胎发生 | 第15页 |
| 1.2.2.3 小孢子胚胎发生 | 第15页 |
| 1.2.2.4 离体愈伤胚胎发生 | 第15-16页 |
| 1.2.3 植物体细胞胚发生相关基因研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.3.1 细胞壁合成及修饰基因 | 第16-17页 |
| 1.2.3.2 激素合成和响应基因 | 第17页 |
| 1.2.3.3 信号转导基因 | 第17-18页 |
| 1.2.3.4 转录因子 | 第18-20页 |
| 1.2.4 转录组测序技术在植物体细胞胚发生中的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.5 柑橘体细胞胚发生研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3 本研究的目的和内容 | 第23-25页 |
| 第二章 柑橘体细胞胚发生及不同组织内参基因筛选 | 第25-46页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1‘伏令夏’甜橙非胚性（NEC）愈伤组织的获得 | 第26页 |
| 2.2.1.2 ‘伏令夏’甜橙胚性愈伤组织来源及不同温度条件下体细胞胚诱导 | 第26-27页 |
| 2.1.1.3 ‘伏令夏’甜橙其它组织器官的获得 | 第27页 |
| 2.1.1.4 实验所用培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.2.2.1 实验材料的分类 | 第28页 |
| 2.2.2.2 候选内参基因的选取 | 第28页 |
| 2.2.2.3 总RNA的提取、检测及第一链cDNA合成 | 第28-29页 |
| 2.2.2.4 PCR扩增候选内参基因序列 | 第29页 |
| 2.2.2.5 qRT-PCR检测 | 第29页 |
| 2.2.2.6 标准曲线的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.2.7 数据分析 | 第30页 |
| 2.2.2.8 验证内参基因的可靠性 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-43页 |
| 2.3.1 候选内参基因的克隆及引物扩增效率的检测 | 第30-31页 |
| 2.3.2 候选内参基因表达谱分析 | 第31页 |
| 2.3.3 候选内参基因的表达稳定性分析 | 第31-39页 |
| 2.3.3.1 geNorm软件分析 | 第34-35页 |
| 2.3.3.2 NormFinder软件分析 | 第35-38页 |
| 2.3.3.3 Bestkeeper软件分析 | 第38-39页 |
| 2.3.3.4 综合排序筛选出最合适内参 | 第39页 |
| 2.3.4 评价筛选内参的可靠性 | 第39-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-46页 |
| 2.4.1 geNorm、NormFinder和BestKeeper三种应用软件的比较 | 第43-44页 |
| 2.4.2 内参基因的筛选问题 | 第44-46页 |
| 第三章 CsFUS3基因克隆及体细胞胚发生功能鉴定 | 第46-77页 |
| 3.1 引言 | 第46-47页 |
| 3.2 材料与方法 | 第47-54页 |
| 3.2.1 实验材料的获得 | 第47-48页 |
| 3.2.1.1‘伏令夏’甜橙不同组织材料 | 第47页 |
| 3.2.1.2 不同柑橘品种胚性愈伤组织的获得及诱导生胚 | 第47页 |
| 3.2.1.3 不同柑橘品种叶片的获得 | 第47页 |
| 3.2.1.4 检测蛋白定量的材料处理 | 第47-48页 |
| 3.2.1.5 实验所用培养基 | 第48页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第48-54页 |
| 3.2.2.1 克隆CsFUS3基因的cDNA及DNA全长 | 第48-49页 |
| 3.2.2.2 CsFUS3基因生物信息学分析 | 第49页 |
| 3.2.2.3 CsFUS3基因Southern拷贝数分析 | 第49页 |
| 3.2.2.4 转录激活实验 | 第49页 |
| 3.2.2.5 CsFUS3基因的qRT-PCR表达分析 | 第49-50页 |
| 3.2.2.6 CsFUS3蛋白表达分析 | 第50页 |
| 3.2.2.7 植物转化超量表达载体构建 | 第50页 |
| 3.2.2.8 农杆菌介导的遗传转化及阳性转基因系鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.2.9 RNA-seq及数据分析 | 第51-52页 |
| 3.2.2.10 内源激素测定及处理 | 第52-53页 |
| 3.2.2.11 ABA及多效唑处理转基因材料 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-72页 |
| 3.3.1 CsFUS3基因cDNA和DNA全长的克隆 | 第54-55页 |
| 3.3.2 CsFUS3基因拷贝数分析 | 第55页 |
| 3.3.3 CsFUS3转录激活分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4 CsFUS3基因的表达分析 | 第57-58页 |
| 3.3.5 CsFUS3蛋白水平的表达 | 第58-59页 |
| 3.3.6 CsFUS3能够增强愈伤组织体细胞胚发生能力 | 第59-60页 |
| 3.3.7 转基因系在体细胞胚发生过程中的转录组分析 | 第60-70页 |
| 3.3.8 ABA和GA的测定及处理 | 第70-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-77页 |
| 3.4.1 CsFUS3通过转录调控和翻译后调控促进体细胞胚发生 | 第72-73页 |
| 3.4.2 CsFUS3调控激素生物合成、降解和信号转导途径 | 第73-75页 |
| 3.4.3 转录因子和激素相互作用很可能促进体细胞胚发生 | 第75-77页 |
| 第四章 转录组分析发掘珠心胚起始发生关键基因 | 第77-95页 |
| 4.1 引言 | 第77-78页 |
| 4.2 材料与方法 | 第78-80页 |
| 4.2.1 柑橘胚珠的收集 | 第78-79页 |
| 4.2.2 石蜡切片 | 第79页 |
| 4.2.3 RNA提取，文库构建和IIIumina GAIIX测序 | 第79-80页 |
| 4.2.4 RNA-seq测序数据分析 | 第80页 |
| 4.2.5 qRT-PCR验证转录组的准确性 | 第80页 |
| 4.3 结果与分析 | 第80-90页 |
| 4.3.1 珠心胚起始时期观察 | 第80-81页 |
| 4.3.2 RNA-seq测序分析 | 第81-82页 |
| 4.3.3 鉴定多胚和单胚品种胚珠差异表达的转录本 | 第82-89页 |
| 4.3.4 多胚/单胚品种特异富集的转录本功能分析 | 第89-90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-95页 |
| 4.4.1 多胚珠心胚发育起始时间早于合子胚 | 第90-92页 |
| 4.4.2 细胞壁合成和修饰基因参与到珠心胚起始过程 | 第92-93页 |
| 4.4.3 激素生物合成与信号转导对珠心胚起始的作用 | 第93页 |
| 4.4.4 在珠心起始过程中的转录调控 | 第93页 |
| 4.4.5 比较愈伤组织体细胞胚发生与珠心胚发育 | 第93-95页 |
| 第五章 总结、讨论与展望 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 附录 | 第111-117页 |
| 附录Ⅰ 部分实验操作 | 第111页 |
| 附录Ⅰ 方法1柑橘组织RNA提取 | 第111页 |
| 附录Ⅰ 方法2反转录mRNA合成cDNA第一链 | 第111-112页 |
| 附录Ⅰ 方法 3 PCR产物的TA克隆 | 第112页 |
| 附录Ⅰ 方法4蛋白质的提取及定量 | 第112-114页 |
| 附录Ⅱ 附表 | 第114-115页 |
| 附录Ⅲ 图版与说明 | 第115-116页 |
| 附录Ⅳ 个人简介及发表论文列表 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
