| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号与缩略语 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-36页 |
| 1.1 多杀菌素的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 多杀菌素的结构v特点和理化性质 | 第15-16页 |
| 1.1.2 多杀菌素的生物合成机理 | 第16-18页 |
| 1.1.2.1 聚酮链的生物合成与修饰 | 第17-18页 |
| 1.1.2.2 三甲氧基鼠李糖及福乐糖胺的合成、修饰与连接转移 | 第18页 |
| 1.2 阿维菌素概述 | 第18-19页 |
| 1.3 核糖体工程技术 | 第19-27页 |
| 1.3.1 核糖体工程概述 | 第20-21页 |
| 1.3.2 核糖体工程的几种重要类型 | 第21-24页 |
| 1.3.3 核糖体工程的应用研究 | 第24-27页 |
| 1.4 基因组重排技术 | 第27-29页 |
| 1.4.1 基因组重排概述 | 第27页 |
| 1.4.2 试验方法概述 | 第27-29页 |
| 1.5 本论文的研究内容和目标 | 第29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 第二章 刺糖多孢菌种内基因组重排筛选多杀菌素高产菌株 | 第36-55页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-42页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.2 培养基和培养条件 | 第37-38页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第38-39页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第39-40页 |
| 2.2.5 核糖体工程筛选模型 | 第40页 |
| 2.2.6 菌丝体的培养 | 第40页 |
| 2.2.7 原生质体制备与再生 | 第40页 |
| 2.2.8 原生质体的计数及再生率计算 | 第40-41页 |
| 2.2.9 基因组重排 | 第41页 |
| 2.2.10 重排菌株初筛及复筛方法 | 第41页 |
| 2.2.11 多杀菌素测定 | 第41-42页 |
| 2.2.12 遗传稳定性实验 | 第42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-53页 |
| 2.3.1 第一轮基因组重排出发菌株的选择 | 第42-47页 |
| 2.3.1.1 抗红霉素菌株的筛选 | 第43-45页 |
| 2.3.1.2 抗链霉素菌株的筛选 | 第45-47页 |
| 2.3.1.3 抗性菌株交叉抗性的验证及遗传稳定性 | 第47页 |
| 2.3.2 原生质体制备及再生条件的研究 | 第47-50页 |
| 2.3.2.1 菌丝体培养方式对原生质体制备及再生的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.2.2 二级种子培养基中蔗糖浓度对原生质体制备及再生的影响 | 第48-49页 |
| 2.3.2.3 P缓冲液中缓冲剂对原生质体再生的影响 | 第49-50页 |
| 2.3.2.4 再生培养基种类对原生质体再生的影响 | 第50页 |
| 2.3.3 基因组重排 | 第50-52页 |
| 2.3.3.1 育种和筛选流程 | 第50-51页 |
| 2.3.3.2 重排次数与菌株效价的研究 | 第51-52页 |
| 2.3.3.3 重组高产菌株的选育 | 第52页 |
| 2.3.4 重排高产菌株的遗传稳定性试验 | 第52-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第三章 刺糖多孢菌与阿维链霉菌基因组重排筛选多杀菌素高产菌株 | 第55-77页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 材料与方法 | 第55-61页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第55-56页 |
| 3.2.2 培养基和培养条件 | 第56-58页 |
| 3.2.3 主要溶液配制 | 第58页 |
| 3.2.4 主要仪器和设备 | 第58-59页 |
| 3.2.5 基因组重排 | 第59-61页 |
| 3.2.5.1 刺糖多孢菌原生质体的制备方法 | 第59-60页 |
| 3.2.5.2 阿维链霉菌原生质体的制备方法 | 第60页 |
| 3.2.5.3 原生质体的融合方法 | 第60-61页 |
| 3.2.5.3.1 樟脑丸熏蒸法 | 第60页 |
| 3.2.5.3.2 电融合法 | 第60-61页 |
| 3.2.5.3.3 紫外线促融合法 | 第61页 |
| 3.2.5.4 融合子的筛选方法 | 第61页 |
| 3.2.5.4.1 融合子初筛 | 第61页 |
| 3.2.5.4.2 融合子验证 | 第61页 |
| 3.2.5.5 原生质体融合率的计算 | 第61页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第61-75页 |
| 3.3.1 重排菌株筛选方法的研究 | 第61-64页 |
| 3.3.1.1 刺糖多孢菌抗性标记的研究 | 第61-64页 |
| 3.3.1.1.1 链霉素抗性标记的研究 | 第62页 |
| 3.3.1.1.2 红霉素抗性标记的研究 | 第62-63页 |
| 3.3.1.1.3 NaCl抗性标记的研究 | 第63-64页 |
| 3.3.1.2 阿维链霉菌可溶性淀粉利用标记的确定 | 第64页 |
| 3.3.1.3 重排菌株筛选方法的确定 | 第64页 |
| 3.3.2 S.spinosa和S.avermitilis原生质体的制备 | 第64-66页 |
| 3.3.3 原生质体促融合条件的研究 | 第66-75页 |
| 3.3.3.1 樟脑熏蒸促融合条件的研究 | 第66-67页 |
| 3.3.3.1.1 樟脑熏蒸对原生质体再生率及融合率的影响 | 第66页 |
| 3.3.3.1.2 樟脑熏蒸对菌株产spinosad的影响 | 第66-67页 |
| 3.3.3.2 电融合条件的研究 | 第67-71页 |
| 3.3.3.2.1 交变电压对原生质体形成串珠的影响 | 第67-69页 |
| 3.3.3.2.2 脉冲宽度对原生质体融合率的影响 | 第69页 |
| 3.3.3.2.3 脉冲个数对原生质体融合率的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.3.2.4 电融合促融对融合子产spinosad的影响 | 第70-71页 |
| 3.3.3.3 紫外线促融合条件的研究 | 第71-75页 |
| 3.3.3.3.1 紫外线促融合条件对原生质体再生率的影响 | 第71-72页 |
| 3.3.3.3.2 紫外线促融合条件对原生质体融合率的影响 | 第72-74页 |
| 3.3.3.3.3 紫外线促融合对融合子产spinosad的影响 | 第74-75页 |
| 3.3.4 重排菌株的遗传稳定性试验 | 第75页 |
| 3.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| 第四章 多杀菌素的发酵工艺研究 | 第77-89页 |
| 4.1 引言 | 第77页 |
| 4.2 材料与方法 | 第77-81页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第78页 |
| 4.2.3 主要溶液 | 第78-79页 |
| 4.2.4 还原糖测 | 第79页 |
| 4.2.5 甲醛法测定氨基氮 | 第79-80页 |
| 4.2.6 菌体浓度的测定 | 第80页 |
| 4.2.7 多杀菌素测定 | 第80页 |
| 4.2.8 摇瓶发酵时间进程曲线的测定 | 第80页 |
| 4.2.9 摇瓶补料发酵的研究 | 第80-81页 |
| 4.2.9.1 补料液中前体物质对发酵效价的影响 | 第80页 |
| 4.2.9.2 补料液中碳源对发酵效价的影响 | 第80-81页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第81-88页 |
| 4.3.1 摇瓶发酵时间进程曲线 | 第81-82页 |
| 4.3.2 前体对多杀菌素产量的影响 | 第82-85页 |
| 4.3.2.1 前体种类对多杀菌素合成的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.2.2 前体加入时间对多杀菌素合成的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.2.3 前体加入浓度对多杀菌素合成的影响 | 第84-85页 |
| 4.3.3 补料液中碳源对多杀菌素生物合成的影响 | 第85-88页 |
| 4.3.3.1 补料液中最适碳源的选择 | 第85-86页 |
| 4.3.3.2 补加葡萄糖对多杀菌素生物合成的影响 | 第86-88页 |
| 4.3.3.2.1 单次补加葡萄糖 | 第86-87页 |
| 4.3.3.2.2 多次补加葡萄糖 | 第87-88页 |
| 4.4 本章小结 | 第88页 |
| 参考文献 | 第88-89页 |
| 第五章 结论与展望 | 第89-92页 |
| 5.1 结论 | 第89-90页 |
| 5.2 展望 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第93页 |
