| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| 1.1 井冈霉素 | 第13-20页 |
| 1.1.1 井冈霉素A简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 井冈霉素实现高产的研究现状 | 第14-17页 |
| 1.1.3 井冈霉素A的合成机制研究 | 第17-20页 |
| 1.2 糖基转移酶 | 第20-23页 |
| 1.2.1 糖基转移酶的应用价值 | 第20页 |
| 1.2.2 糖基转移酶的分类进展 | 第20-22页 |
| 1.2.3 糖基转移酶在井冈霉素A合成中的研究现状 | 第22-23页 |
| 1.3 尿苷二磷酸葡萄糖 | 第23-29页 |
| 1.3.1 尿苷二磷酸葡萄糖简介 | 第23-24页 |
| 1.3.2 UDPG的生物合成现状 | 第24-28页 |
| 1.3.3 UDPG在井冈霉素A合成的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.4 大肠杆菌 | 第29-33页 |
| 1.4.1 大肠杆菌简介 | 第29-30页 |
| 1.4.2 大肠杆菌工程菌多基因共表达 | 第30-32页 |
| 1.4.3 大肠杆菌在静息细胞催化中的应用进展 | 第32-33页 |
| 1.5 本论文的研究内容和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 糖基转移酶与UDPG关键酶原核共表达系统的建立 | 第34-52页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-39页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第34-35页 |
| 2.2.2 培养基和溶液 | 第35-37页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.3.1 链霉菌基因组DNA的小量提取 | 第39页 |
| 2.3.2 碱裂解法提取质粒 | 第39-40页 |
| 2.3.3 valG、galU和pgm的TA克隆及验证 | 第40-42页 |
| 2.3.4 valG、galU和pgm共表达载体的构建及验证 | 第42-45页 |
| 2.3.5 valG、galU和pgm共表达蛋白水平的验证及酶活验证 | 第45-46页 |
| 2.4 实验结果及讨论 | 第46-51页 |
| 2.4.1 valG、galU和pgm的TA克隆及验证 | 第46-48页 |
| 2.4.2 valG、galU和pgm共表达载体的构建及验证 | 第48-50页 |
| 2.4.3 valG、galU和pgm共表达蛋白水平的验证及酶活验证 | 第50-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 valG、galU和pgm多基因在大肠杆菌中的共表达优化 | 第52-70页 |
| 3.1 引言 | 第52-53页 |
| 3.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.2.1 菌株 | 第53页 |
| 3.2.2 实验溶液 | 第53页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第53-54页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.3.1 菌体培养及诱导方法 | 第54-55页 |
| 3.3.2 IPTG和乳糖诱导前培养时间的优化的比较 | 第55页 |
| 3.3.3 IPTG和乳糖添加量优化的比较 | 第55页 |
| 3.3.4 IPTG和乳糖诱导时间优化的比较 | 第55页 |
| 3.3.5 IPTG和乳糖诱导温度优化的比较 | 第55-56页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第56页 |
| 3.3.7 全细胞UDPG含量的检测 | 第56-57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-69页 |
| 3.4.1 乳糖和IPTG诱导前培养时间比较 | 第57-60页 |
| 3.4.2 乳糖和IPTG添加量诱导比较 | 第60-63页 |
| 3.4.3 乳糖和IPTG最佳诱导时间 | 第63-65页 |
| 3.4.4 乳糖和IPTG最佳诱导温度 | 第65-68页 |
| 3.4.5 强化UDPG合成途径的检测 | 第68-69页 |
| 3.5 小结 | 第69-70页 |
| 第四章 重组菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的条件优化 | 第70-82页 |
| 4.1 引言 | 第70-71页 |
| 4.2 实验材料 | 第71-72页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第71页 |
| 4.2.2 实验培养基及溶液 | 第71页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第71页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第71-72页 |
| 4.3 实验方法 | 第72-74页 |
| 4.3.1 以IPTG诱导与乳糖诱导的工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化能力的比较 | 第72页 |
| 4.3.2 工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的进程研究 | 第72-73页 |
| 4.3.3 菌体浓度对工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第73页 |
| 4.3.4 纤维二糖浓度对工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第73页 |
| 4.3.5 底物浓度对工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第73页 |
| 4.3.6 工程菌静息细胞对井冈霉素A粗品中井冈羟胺A糖基化的初步研究 | 第73-74页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第74-80页 |
| 4.4.1 以IPTG诱导与乳糖诱导的工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化能力的比较 | 第74-75页 |
| 4.4.2 工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的进程研究 | 第75-76页 |
| 4.4.3 菌体浓度对工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第76-77页 |
| 4.4.4 纤维二糖浓度对工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第77-78页 |
| 4.4.5 底物浓度对工程菌静息细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第78-79页 |
| 4.4.6 工程菌静息细胞对井冈霉素A粗品中井冈羟胺A糖基化的初步研究 | 第79-80页 |
| 4.5 小结 | 第80-82页 |
| 第五章 总结和展望 | 第82-84页 |
| 5.1 本论文的主要结论 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第94页 |
