| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 细胞色素P450概况 | 第12-16页 |
| 1.1.1 细胞色素P450s | 第12页 |
| 1.1.2 细胞色素P450 | 第12-14页 |
| 1.1.3 NADPH-细胞色素 P450 还原酶 | 第14-15页 |
| 1.1.4 P450 酶与 CPR 的关系 | 第15页 |
| 1.1.5 P450 的羟基化反应 | 第15-16页 |
| 1.2 10-HDA研究概况 | 第16-19页 |
| 1.2.1 10-HDA简介 | 第16页 |
| 1.2.2 10-HDA物理化学性质 | 第16-17页 |
| 1.2.3 10-HDA的功能特性 | 第17-19页 |
| 1.3 10-HDA的获得方法 | 第19-20页 |
| 1.4 课题背景意义及研究内容 | 第20-22页 |
| 1.4.1 背景意义 | 第20-21页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 蜜蜂Cyp49A1及Cyp9e2基因在毕赤酵母中的异源表达 | 第22-47页 |
| 2.1 实验材料及设备 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 引物 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂及培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 工蜂上颚腺的获取 | 第25页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第26页 |
| 2.2.4 目的基因的扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.5 表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.6 基因编码蛋白结构分析 | 第31页 |
| 2.2.7 毕赤酵母工程菌GS115/pPICZαA-Cyp49A1和GS115/pPICZαA-Cyp9e2的制备 | 第31-33页 |
| 2.2.8 甲醇诱导目的蛋白表达 | 第33-34页 |
| 2.2.9 CO差光谱法测定蛋白CYP49A1、CYP9e2的浓度 | 第34页 |
| 2.2.10 目的蛋白CYP49A1、CYP9e2的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-45页 |
| 2.3.1 工蜂上颚腺 | 第35-36页 |
| 2.3.2 总RNA及cDNA的获得 | 第36页 |
| 2.3.3 Cyp49A1及Cyp9e2目的基因的获得 | 第36-37页 |
| 2.3.4 表达载体pPICZαA-Cyp49A1和pPICZαA-Cyp9e2的构建 | 第37-40页 |
| 2.3.5 CYP49A1和CYP9e2序列别对与蛋白结构分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 获得工程菌GS115/pPICZαA-Cyp49A1和GS115/pPICZαA-Cyp9e2 | 第41-43页 |
| 2.3.7 目的蛋白 CYP49A1 及 CYP9e2 的诱导表达 | 第43-44页 |
| 2.3.8 目的蛋白CYP49A1及CYP9e2浓度分析 | 第44页 |
| 2.3.9 目的蛋白CYP49A1及CYP9e2纯化结果 | 第44-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第3章 蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-49页 |
| 3.1.1 实验原料 | 第47页 |
| 3.1.2 引物 | 第47-48页 |
| 3.1.3 试剂原料，培养基与仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 3.2.1 CPR基因的扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.2 意蜂CPR氨基酸序列分析 | 第50页 |
| 3.2.3 重组表达载体pET-28a-CPR的构建 | 第50-51页 |
| 3.2.4 工程菌E.coli(pET-28a-CPR)的构建 | 第51页 |
| 3.2.5 外源蛋白CPR的诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.2.6 外源蛋白CPR的分离纯化 | 第52页 |
| 3.2.7 外源蛋白CPR的酶活测定 | 第52-53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-56页 |
| 3.3.1 CPR基因的扩增 | 第53页 |
| 3.3.2 CPR蛋白氨基酸序列分析 | 第53-54页 |
| 3.3.3 构建工程菌E.coli(pET-28a-CPR) | 第54-55页 |
| 3.3.4 目的蛋白CPR的诱导表达及纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.5 目的蛋白CPR的活性 | 第56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-59页 |
| 第4章 意蜂工蜂CYP49A1及CYP9e2生物特性探究 | 第59-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.1.3 仪器与设备 | 第60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-61页 |
| 4.2.1 目的蛋白CYP49A1、CYP9e2与底物的结合性测定 | 第60页 |
| 4.2.2 CYP49A1、CYP9e2生物特性分析 | 第60-61页 |
| 4.3 实验结果 | 第61-69页 |
| 4.3.1 CYP49A1、CYP9e2蛋白与底物的结合性分析 | 第61-62页 |
| 4.3.2 CYP49A1对脂肪酸和烷烃的羟基化特性 | 第62-66页 |
| 4.3.4 CYP9e2对脂肪酸和烷烃的羟基化特性 | 第66-68页 |
| 4.3.5 CYP9e2羟基化特性与 10-HDA合成关系分析 | 第68-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第5章 总结与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 总结 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 硕士期间主要科研成果 | 第81页 |
