| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 前言 | 第10-11页 |
| 1.2 乳酸菌应对酸胁迫的生理响应机制 | 第11-14页 |
| 1.2.1 胞内pH的调控机制 | 第11-12页 |
| 1.2.2 细胞膜的变化 | 第12-13页 |
| 1.2.3 大分子的保护和修复机制 | 第13页 |
| 1.2.4 代谢途径的改变 | 第13-14页 |
| 1.3 基因工程技术在乳酸菌中的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 乳酸菌耐受能力研究进展 | 第14页 |
| 1.3.2 基因工程技术在乳酸菌中的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.3 利用基因工程技术提高乳酸菌环境胁迫抗性 | 第15页 |
| 1.3.4 大肠杆菌表达系统 | 第15-16页 |
| 1.4 本论文的研究目的及意义 | 第16-18页 |
| 第2章 植物乳杆菌ZDY 2013的耐酸机制研究 | 第18-33页 |
| 2.1 前言 | 第18-19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 材料 | 第19页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器设备 | 第19页 |
| 2.2.3 相关试剂与培养基配制 | 第19-20页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-31页 |
| 2.3.1 植物乳杆菌生长曲线及酸耐受性能 | 第23-24页 |
| 2.3.2 酸处理对细胞膜完整性的影响 | 第24-26页 |
| 2.3.3 酸处理对胞内pH的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.4 酸处理对胞内ATP含量及Na~+, K~+_-ATP酶活性的影响 | 第27-28页 |
| 2.3.5 胞内氨基酸含量测定 | 第28-30页 |
| 2.3.6 精氨酸脱亚胺酶活性测定 | 第30页 |
| 2.3.7 谷氨酸脱羧酶活性测定 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 植物乳杆菌谷氨酸脱氢酶gdh基因的克隆及表达 | 第33-53页 |
| 3.1 前言 | 第33-34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第34页 |
| 3.2.2 主要试剂与仪器设备 | 第34页 |
| 3.2.3 相关试剂与培养基配制 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-45页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第35-36页 |
| 3.3.2 植物乳杆菌ZDY 2013基因组DNA的提取 | 第36页 |
| 3.3.3 gdh基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.3.4 PCR产物的纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.5 pMD18-gdh的构建 | 第38-41页 |
| 3.3.6 重组表达载体pET32a（+）-gdh的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.7 基因在大肠杆菌中的表达 | 第43-44页 |
| 3.3.8 gdh诱导条件的优化 | 第44页 |
| 3.3.9 融合蛋白的纯化 | 第44页 |
| 3.3.10 谷氨酸脱氢酶活性测定 | 第44-45页 |
| 3.3.11 谷氨酸脱氢酶表达菌株酸耐受性能评价 | 第45页 |
| 3.4 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.4.1 克隆载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.4.2 表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.4.3 目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第48页 |
| 3.4.4 诱导条件的优化 | 第48-49页 |
| 3.4.5 融合蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 3.4.6 谷氨酸脱氢酶的活性测定 | 第50页 |
| 3.4.7 谷氨酸脱氢酶重组菌株酸耐受性测定 | 第50-51页 |
| 3.5 讨论 | 第51-53页 |
| 第4章 结论与展望 | 第53-55页 |
| 4.1 结论 | 第53-54页 |
| 4.1.1 植物乳杆菌耐酸生理机制 | 第53页 |
| 4.1.2 谷氨酸脱氢酶基因的原核表达 | 第53-54页 |
| 4.1.3 谷氨酸脱氢酶功能性研究 | 第54页 |
| 4.2 展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-71页 |
| 附录A1 仪器与设备 | 第62-64页 |
| 附录A2 主要试剂 | 第64-66页 |
| 附录B pET-32a(+)载体图谱 | 第66-68页 |
| 附录C DNA测序结果 | 第68-71页 |
| 个人介绍 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第72页 |
