| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9基因组编辑技术概括 | 第10-16页 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas9的起源及发展 | 第10-12页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas9的结构和原理 | 第12-13页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9 U6启动子驱动sgRNA的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 CRISPR/Cas9在植物中的应用及存在问题 | 第14-15页 |
| 1.1.5 GGB抗旱负调控基因研究背景 | 第15-16页 |
| 1.2 本研究目的、意义及研究内容 | 第16-19页 |
| 1.2.1 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 1.2.3 技术路线 | 第18-19页 |
| 第2章 棉花花粉中高效转录U6启动子克隆及功能分析 | 第19-29页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-23页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 棉花基因组DNA的提取 | 第19页 |
| 2.1.3 GbU6启动子的克隆 | 第19-21页 |
| 2.1.4 GbU6启动子序列分析 | 第21页 |
| 2.1.5 GbU6P::GUS融合表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.1.6 GbU6::GUS在棉花花粉中的瞬时表达 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-26页 |
| 2.2.1 启动子第一轮扩增产物的鉴定 | 第23页 |
| 2.2.2 第二轮Transfer PCR扩增产物的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 GbU6启动子序列分析 | 第24页 |
| 2.2.4 GbU6启动子驱动GUS报告基因表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.5 不同GbU6启动子的功能分析 | 第25-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-28页 |
| 2.4 小结 | 第28-29页 |
| 第3章 棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定 | 第29-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第29页 |
| 3.1.2 不同截短GbU6-5P启动子的克隆 | 第29页 |
| 3.1.3 不同截短GbU6-5P::GUS融合的植物表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.4 农杆菌真空渗透转化棉花花粉 | 第31-32页 |
| 3.1.5 不同截短GbU6-5Ps::GUS在棉花花粉中的瞬时表达分析 | 第32页 |
| 3.1.6 农杆菌真空渗透与非真空渗透转化效率比较 | 第32页 |
| 3.1.7 其它四种海岛棉U6启动子以及相应截短启动子的克隆与转录活性分析 | 第32-33页 |
| 3.2 结果与分析 | 第33-38页 |
| 3.2.1 不同截短GbU6-5P启动子扩增产物鉴定 | 第33页 |
| 3.2.2 不同截短GbU6-5P::GUS融合表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.3 不同截短GbU6-5P启动子功能分析 | 第34-35页 |
| 3.2.4 GUS活性测定 | 第35-36页 |
| 3.2.5 真空渗透与非真空渗透转化效率比较 | 第36-37页 |
| 3.2.6 其它四种海岛棉U6启动子的相应截短启动子的转录活性分析 | 第37-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 第4章 CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥GGB基因突变体的鉴定 | 第41-52页 |
| 4.1 材料与方法 | 第41-44页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第41页 |
| 4.1.2 CRISPR/Cas9基因编辑载体构建 | 第41页 |
| 4.1.3 农杆菌转化载体构建 | 第41-42页 |
| 4.1.4 拟南芥遗传转化 | 第42页 |
| 4.1.5 拟南芥ggb突变体植株筛选及鉴定 | 第42-43页 |
| 4.1.6 RT-PCR检测At GGB基因表达量 | 第43页 |
| 4.1.7 拟南芥离体叶片失水率测定 | 第43页 |
| 4.1.8 抗旱表型鉴定及单株种子量测定 | 第43-44页 |
| 4.2 结果与分析 | 第44-49页 |
| 4.2.1 AtGGB突变位点选择 | 第44页 |
| 4.2.2 CRISPR/Cas9基因编辑载体构建 | 第44-45页 |
| 4.2.3 Atggb纯合突变体检测 | 第45-46页 |
| 4.2.4 AtGGB基因表达量检测 | 第46-47页 |
| 4.2.5 Atggb突变体失水率测定 | 第47页 |
| 4.2.6 Atggb突变体耐旱性表型鉴定 | 第47-48页 |
| 4.2.7 Atggb突变体单株种子量测定 | 第48-49页 |
| 4.3 讨论 | 第49-50页 |
| 4.4 小结 | 第50-52页 |
| 第5章 结论与展望 | 第52-54页 |
| 5.1 主要结论 | 第52-53页 |
| 5.1.1 棉花花粉中高效转录U6启动子克隆及功能分析 | 第52页 |
| 5.1.2 棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定 | 第52-53页 |
| 5.1.3 CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥GGB基因突变体的鉴定 | 第53页 |
| 5.2 研究展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
