| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 胰蛋白酶简介 | 第9-10页 |
| 1.2 胰蛋白酶的结构特点 | 第10页 |
| 1.3 胰蛋白酶的活化机制 | 第10-11页 |
| 1.4 胰蛋白酶的功能机制 | 第11页 |
| 1.5 胰蛋白酶基因的研究 | 第11-14页 |
| 1.5.1 真菌胰蛋白酶基因的研究 | 第12页 |
| 1.5.2 脊椎动物胰蛋白酶基因的研究 | 第12-13页 |
| 1.5.3 无脊椎动物胰蛋白酶基因的研究 | 第13-14页 |
| 1.6 胰蛋白酶的酶学性质研究 | 第14-16页 |
| 1.7 胰蛋白酶的应用价值 | 第16-17页 |
| 1.7.1 胰蛋白酶在医药方面的应用 | 第16页 |
| 1.7.2 胰蛋白酶在轻工业方面的应用 | 第16页 |
| 1.7.3 胰蛋白酶基因的研究价值 | 第16-17页 |
| 1.8 南极磷虾研究进展 | 第17页 |
| 1.8.1 南极磷虾 | 第17页 |
| 1.8.2 南极磷虾胰蛋白酶的研究进展 | 第17页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.10 本研究的内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-38页 |
| 2.1 实验材料及仪器设备 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.3 溶液的配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-38页 |
| 2.2.1 实验用品的预处理 | 第21页 |
| 2.2.2 南极磷虾总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 南极磷虾cDNA的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.4 南极磷虾胰蛋白酶基因全长序列的克隆 | 第22-28页 |
| 2.2.4.1 引物合成 | 第22-23页 |
| 2.2.4.2 3'RACE扩增 | 第23-27页 |
| 2.2.4.3 基因编码序列扩增 | 第27页 |
| 2.2.4.4 PCR产物的回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备、连接及转化 | 第28-30页 |
| 2.2.5.1 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.5.2 连接 | 第29页 |
| 2.2.5.3 转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 序列比对与系统进化分析 | 第30页 |
| 2.2.7 EsTrypsin-1的重组表达 | 第30-36页 |
| 2.2.7.1 重组表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.7.2 重组表达载体转化宿主菌 | 第32-33页 |
| 2.2.7.3 重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.2.7.4 含有重组质粒宿主菌的扩大培养 | 第34-35页 |
| 2.2.7.5 重组蛋白的分离纯化 | 第35页 |
| 2.2.7.6 重组蛋白的透析复性 | 第35页 |
| 2.2.7.7 重组蛋白含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.8 重组蛋白的活性检测 | 第36-38页 |
| 2.2.8.1 温度对胰蛋白酶活性的影响 | 第36页 |
| 2.2.8.2 pH对胰蛋白酶活性的影响 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-63页 |
| 3.1 南极磷虾胰蛋白酶基因的克隆与分析 | 第38-50页 |
| 3.1.1 南极磷虾RNA的提取及反转 | 第38页 |
| 3.1.2 EsTrypsin-1基因3'端的RACE扩增 | 第38-39页 |
| 3.1.3 EsTrypsin-2基因3'端的RACE扩增 | 第39-40页 |
| 3.1.4 EsTrypsin-3基因3'端的RACE扩增 | 第40页 |
| 3.1.5 菌落PCR鉴定 | 第40-42页 |
| 3.1.6 EsTrypsin-1的序列分析 | 第42-43页 |
| 3.1.7 EsTrypsin-1的同源性分析 | 第43-44页 |
| 3.1.8 EsTrypsin-1的多序列比对分析 | 第44-46页 |
| 3.1.9 EsTrypsin-1的进化分析 | 第46-50页 |
| 3.2 EsTpsin-1的体外重组表达及蛋白的活性测定 | 第50-60页 |
| 3.2.1 EsTrypsin-1的体外重组表达 | 第50-53页 |
| 3.2.2 EsTrypsin-1的活性测定 | 第53-60页 |
| 3.2.2.1 南极磷虾胰蛋白酶的最适温度 | 第53-56页 |
| 3.2.2.2 南极磷虾胰蛋白酶的最适pH | 第56-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 硕士期间的其它工作 | 第63-73页 |
| 4.1 过氧化物酶简介 | 第63页 |
| 4.2 南极磷虾EsPrx 6基因的3'端克隆 | 第63-64页 |
| 4.3 EsPrx 6的序列分析 | 第64-66页 |
| 4.4 EsPrx 6的同源性分析 | 第66-67页 |
| 4.5 EsPrx 6多序列比对分析 | 第67-69页 |
| 4.6 EsPrx 6基因的进化分析 | 第69-72页 |
| 4.7 讨论 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第82-83页 |
