摘要 | 第9-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第14-16页 |
第1章 文献综述 | 第16-34页 |
1.1 FcRn的结构 | 第16-17页 |
1.2 FcRn的分布 | 第17-18页 |
1.3 FcRn的配体 | 第18-20页 |
1.4 FcRn的功能 | 第20-26页 |
1.4.1 FcRn介导IgG的双向转运 | 第20-23页 |
1.4.2 FcRn介导特异性IgG转运及抗原—抗体复合物的递呈 | 第23-24页 |
1.4.3 FcRn保护IgG和白蛋白免受降解的作用 | 第24-26页 |
1.5 FcRn在疾病治疗中的作用 | 第26-27页 |
1.5.1 调节配体与FcRn的结合能力 | 第26-27页 |
1.5.2 黏膜递呈作用 | 第27页 |
1.6 猪传染性胃肠炎病毒 | 第27-30页 |
1.6.1 TGEV的基因组结构 | 第27-28页 |
1.6.2 TGEV生物学特点 | 第28页 |
1.6.3 TGEV主要编码蛋白及功能 | 第28-29页 |
1.6.4 TGEV感染的致病机理 | 第29-30页 |
1.7 NF-κB信号通路 | 第30-32页 |
1.7.1 NF-κB/Rel家族 | 第30-31页 |
1.7.2 NF-κB的激活 | 第31-32页 |
1.8 MAPK信号通路 | 第32-34页 |
第2章 猪小肠上皮细胞FcRn表达及功能研究 | 第34-57页 |
2.1 研究目的与意义 | 第34页 |
2.2 实验材料 | 第34-38页 |
2.2.1 细胞、毒株 | 第34页 |
2.2.2 主要试剂 | 第34-35页 |
2.2.3 抗体及Western blot所需实验材料 | 第35页 |
2.2.4 细胞胞转模型相关材料 | 第35页 |
2.2.5 细胞培养基及其配置 | 第35页 |
2.2.6 细菌培养基及其配置 | 第35-36页 |
2.2.7 主要缓冲液与相关试剂及其配置 | 第36-37页 |
2.2.8 主要实验仪器及设备 | 第37-38页 |
2.2.9 分子生物学分析软件 | 第38页 |
2.2.10 统计学方法 | 第38页 |
2.3 实验方法 | 第38-44页 |
2.3.1 猪FcRn的克隆 | 第38-40页 |
2.3.2 IgG和IgY的生物素标记 | 第40页 |
2.3.3 生物素标记的IgG(biotin-IgG)体外胞转实验 | 第40-41页 |
2.3.4 Western blot检测biotin-IgG跨膜转运 | 第41页 |
2.3.5 定量ELISA检测 | 第41-42页 |
2.3.6 激光共聚焦显微镜观察 | 第42-43页 |
2.3.7 间接免疫荧光实验 | 第43页 |
2.3.8 免疫共沉淀 | 第43-44页 |
2.3.9 猪传染性胃肠炎病毒的增殖 | 第44页 |
2.3.10 病毒滴度的测定 | 第44页 |
2.4 结果与分析 | 第44-54页 |
2.4.1 FcRn基因的克隆、序列分析与表达 | 第44-47页 |
2.4.2 FcRn的分布 | 第47-48页 |
2.4.3 猪FcRn介导IgG双向胞转作用 | 第48-50页 |
2.4.4 竞争性抑制FcRn介导IgG胞转作用 | 第50-51页 |
2.4.5 FcRn与IgG在IPEC-J2细胞系上的共定位 | 第51页 |
2.4.6 FcRn与IgG结合的pH依赖性 | 第51-52页 |
2.4.7 FcRn介导特异性IgG转运中和TGEV作用 | 第52-54页 |
2.5 讨论 | 第54-57页 |
2.5.1 FcRn的基因序列 | 第54-55页 |
2.5.2 FcRn在细胞上的分布 | 第55页 |
2.5.3 FcRn介导IgG的双向胞转作用 | 第55-56页 |
2.5.4 FcRn介导特异性IgG转运 | 第56-57页 |
第3章 TGEV感染激活NF-κB信号通路调控FcRn表达研究 | 第57-79页 |
3.1 研究目的与意义 | 第57页 |
3.2 实验材料 | 第57-60页 |
3.2.1 细胞、毒株 | 第57页 |
3.2.2 主要试剂 | 第57-58页 |
3.2.3 抗体及Western blot所需实验材料 | 第58页 |
3.2.4 细胞转染相关材料 | 第58页 |
3.2.5 凝胶迁移(EMSA)实验相关材料 | 第58页 |
3.2.6 主要缓冲液与相关试剂及其配置 | 第58页 |
3.2.7 载体与质粒 | 第58-59页 |
3.2.8 主要实验仪器及设备 | 第59-60页 |
3.2.9 分子生物学信息软件 | 第60页 |
3.3 实验方法 | 第60-65页 |
3.3.1 猪传染性胃肠炎病毒的增殖 | 第60页 |
3.3.2 病毒滴度的测定 | 第60页 |
3.3.3 IPEC-J2细胞总RNA提取及反转录反应 | 第60页 |
3.3.4 荧光定量RT-PCR检测基因mRNA水平 | 第60-61页 |
3.3.5 Western blot实验 | 第61页 |
3.3.6 双荧光素酶报告实验 | 第61页 |
3.3.7 激光共聚焦显微镜观察 | 第61页 |
3.3.8 启动子荧光素酶报告载体的构建 | 第61-62页 |
3.3.9 染色质免疫共沉淀(CHIP)实验 | 第62-63页 |
3.3.10 凝胶迁移(EMSA)实验 | 第63-65页 |
3.3.11 统计学方法 | 第65页 |
3.4 结果与分析 | 第65-76页 |
3.4.1 TGEV感染IPEC-J2细胞诱导FcRn上调表达 | 第65-66页 |
3.4.2 TGEV感染IPEC-J2细胞激活NF-κB信号通路 | 第66-67页 |
3.4.3 TGEV感染上调FcRn的表达与NF-κB信号通路有关 | 第67-69页 |
3.4.4 FcRn转录起始位点的分析 | 第69-70页 |
3.4.5 FcRn启动子区域p65结合位点分析 | 第70-71页 |
3.4.6 猪FcRn启动子在IPEC-J2细胞中的转录激活分析 | 第71-72页 |
3.4.7 超表达猪p65能够激活FcRn启动子荧光素酶活性 | 第72-73页 |
3.4.8 CHIP实验分析FcRn基因启动子区p65结合位点 | 第73-75页 |
3.4.9 EMSA实验进一步验证p65结合位点 | 第75-76页 |
3.5 讨论 | 第76-79页 |
3.5.1 TGEV感染激活NF-κB信号通路 | 第76-77页 |
3.5.2 FcRn表达调控的研究 | 第77-78页 |
3.5.3 FcRn上调表达的生物学意义 | 第78-79页 |
第4章 结论 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-96页 |
致谢 | 第96-97页 |
附录 | 第97-99页 |
个人资料 | 第99页 |
教育经历 | 第99页 |
在读期间发表的主要文章 | 第99-100页 |