| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 钙磷蛋白的研究进展 | 第14-23页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1 EF 手型蛋白超家族 | 第14-16页 |
| ·EF 手型模体的结构 | 第14-15页 |
| ·EF 手型蛋白的分类 | 第15页 |
| ·EF 手型蛋白亚家族 | 第15-16页 |
| 2 钙磷蛋白 | 第16-23页 |
| ·CAPS 的分类 | 第16-17页 |
| ·钙磷蛋白的结构 | 第17-20页 |
| ·Type-1 CAPS 的结构 | 第17-19页 |
| ·Type-2 CAPS 的结构 | 第19-20页 |
| ·CAPS 的生物学功能 | 第20-22页 |
| ·CAPS 的研究现状及展望 | 第22-23页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第23-26页 |
| 1 实验目的和意义 | 第23页 |
| 2 实验内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程 | 第24-26页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第26-34页 |
| 1 生物信息学工具 | 第26页 |
| 2 分析流程及结果 | 第26-32页 |
| ·BmCAPS 基因序列分析 | 第26-28页 |
| ·疏水性分析 | 第28页 |
| ·信号肽分析 | 第28-29页 |
| ·跨膜结构域预测 | 第29-30页 |
| ·定位预测 | 第30页 |
| ·蛋白特性及功能分析 | 第30页 |
| ·氨基酸序列的同源性分析 | 第30-31页 |
| ·进化树的构建 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 家蚕Bm CAPS 重组蛋白的原核表达 | 第34-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-37页 |
| 2 方法 | 第37-43页 |
| ·pET-28a(+)-BmCAPS 重组质粒的构建 | 第37-42页 |
| ·PCR 扩增BmCAPS 基因 | 第37-38页 |
| ·凝胶回收纯化PCR 产物 | 第38页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)载体双酶切与回收 | 第38-39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·CaC12 法制备E.coli TG1 感受态细胞 | 第39-40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmCAPS 的筛选与鉴定 | 第40-42页 |
| ·BmCAPS 重组蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli BL21 Star 感受态细胞 | 第42页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmCAPS 的筛选与鉴定 | 第42页 |
| ·His-BmCAPS 重组蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第43页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmCAPS 的鉴定 | 第43-44页 |
| ·His-BmCAPS 重组蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 Bm CAPS 重组蛋白的纯化及抗体制备 | 第47-59页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·主要试剂的配制 | 第47-49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| ·重组蛋白的亲和纯化 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白的表达存在形式分析 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的大量表达与样品制备 | 第50页 |
| ·Ni-NTA 柱亲和纯化重组蛋白 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的FPLC 纯化和质谱分析 | 第51页 |
| ·重组蛋白的FPLC 纯化 | 第51页 |
| ·重组蛋白的质谱分析 | 第51页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| ·Bradford 法蛋白定量 | 第51页 |
| ·抗原制备 | 第51-52页 |
| ·免疫动物 | 第52页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第52页 |
| ·抗体效价测定 | 第52-53页 |
| ·抗体特异性检测 | 第53-54页 |
| ·抗体纯化 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| ·重组蛋白表达形式的确定及蛋白纯化 | 第54-55页 |
| ·FPLC 纯化及质谱分析 | 第55页 |
| ·抗体效价测定 | 第55-56页 |
| ·抗体特异性检测 | 第56-57页 |
| ·抗体纯化 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 亚细胞定位 | 第59-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第59-60页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·主要试剂的配制 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-61页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第60页 |
| ·Western blotting 检测细胞中BmCAPS 蛋白 | 第60页 |
| ·免疫荧光法亚细胞定位 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-62页 |
| ·Western blotting 分析 | 第61页 |
| ·亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第七章 BmCAPS 基因的转录和表达分析 | 第64-75页 |
| 1 材料与试剂 | 第64页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·主要试剂的配制 | 第64页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第64页 |
| ·Western blotting 所需试剂 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-68页 |
| ·总RNA 的提取及定量 | 第64-65页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第65-66页 |
| ·荧光定量PCR 检测BmCAPS mRNA 在家蚕中的转录水平 | 第66-67页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR | 第66-67页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第67页 |
| ·总蛋白的提取 | 第67页 |
| ·Western blotting 检测BmCAPS 蛋白在家蚕中的表达水平 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-73页 |
| ·家蚕各发育时期中BmCAPS mRNA 的转录分析 | 第68-70页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmCAPS mRNA 的转录分析 | 第70-72页 |
| ·家蚕各发育时期中Bm CAPS 蛋白的表达分析 | 第72页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中Bm CAPS 蛋白的表达分析 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
