| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌的耐药性 | 第12-13页 |
| 1.2 细菌群体感应系统 | 第13-18页 |
| 1.2.1 细菌群体感应系统简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 金黄色葡萄球菌群体感应系统 | 第14-16页 |
| 1.2.3 AgrC | 第16-17页 |
| 1.2.4 AgrA | 第17页 |
| 1.2.5 AIP信号分子 | 第17-18页 |
| 1.3 人工细胞膜体系简介 | 第18-21页 |
| 1.3.1 脂质体 | 第18-19页 |
| 1.3.2 蛋白脂质体 | 第19-21页 |
| 1.4 本研究工作的内容和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌反应调节蛋白AgrA的表达与纯化 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.2.1 实验菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第23页 |
| 2.2.3 主要试剂与规格 | 第23-25页 |
| 2.2.4 培养基与溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.3.1 表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.3.2 AgrA-GFP蛋白异源表达体系的优化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 GFP荧光测定 | 第27页 |
| 2.3.4 AgrA-GFP与AgrA蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE电泳与Western blot检测 | 第28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-36页 |
| 2.4.1 重组表达载体pET-28a(+)-AgrA和pET-28a(+)-AgrA-GFP的构建 | 第28-29页 |
| 2.4.2 表达菌株的筛选 | 第29-30页 |
| 2.4.3 Box-Behnken 设计法优化蛋白表达条件 | 第30-33页 |
| 2.4.4 AgrA-GFP和AgrA蛋白的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.4.5 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 受体蛋白AgrC跨膜镶嵌的人工细胞膜体系的构建及其评价 | 第36-51页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-39页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第36页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第36-37页 |
| 3.2.3 主要试剂与规格 | 第37-38页 |
| 3.2.4 培养基与溶液配制 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 蛋白的表达与纯化 | 第39页 |
| 3.3.2 脂质体的制备 | 第39-40页 |
| 3.3.3 脂质体的表征 | 第40页 |
| 3.3.4 蛋白脂质体的制备 | 第40-41页 |
| 3.3.5 AgrC蛋白脂质体中AgrC取向分析 | 第41-42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-51页 |
| 3.4.1 最佳缓冲体系的筛选 | 第42页 |
| 3.4.2 带负电磷脂比例和胆固醇含量对脂质体稳定性的影响 | 第42-44页 |
| 3.4.3 最佳镶嵌比例的确定 | 第44-46页 |
| 3.4.4 蛋白脂质体中AgrC取向分析 | 第46-48页 |
| 3.4.5 讨论 | 第48-51页 |
| 第四章 AgrC/AgrA双组份信号转导模型的构建与EMSA评价 | 第51-62页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 主要仪器与设备 | 第51-52页 |
| 4.2.2 主要试剂与规格 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.3.1 AgrA蛋白活性检测 | 第52-53页 |
| 4.3.2 AgrC激酶活性的测定 | 第53页 |
| 4.3.3 AgrC/AgrA双组份信号转导模型的构建 | 第53-55页 |
| 4.3.4 启动子P2P3核心序列的复性 | 第55页 |
| 4.3.5 AgrC/AgrA双组份信号转导模型的EMSA检测 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第56-62页 |
| 4.4.1 AgrA蛋白活性的检测 | 第56-57页 |
| 4.4.2 AgrC蛋白活性的验证 | 第57-58页 |
| 4.4.3 复性后P2P3核心序列的检测 | 第58页 |
| 4.4.4 AgrC/AgrA双组份信号转导模型的EMSA检测 | 第58-59页 |
| 4.4.5 AgrC对EMSA实验的影响 | 第59-60页 |
| 4.4.6 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 总结与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62页 |
| 5.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
