| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 微重力及模拟微重力研究 | 第10-13页 |
| 1.1.1 微重力及模拟微重力环境 | 第10-11页 |
| 1.1.2 微重力的空间生命科学研究 | 第11-13页 |
| 1.2 微重力的生物学研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 微重力对生命体的影响 | 第13-15页 |
| 1.2.2 微重力对细胞的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.3 本课题组前期研究 | 第16-17页 |
| 1.3 原位杂交技术及研究现状 | 第17-19页 |
| 1.3.1 原位杂交技术 | 第18页 |
| 1.3.2 原位杂交中探针的选择 | 第18-19页 |
| 1.3.3 RNA为探针的原位杂交应用 | 第19页 |
| 1.4 斑马鱼作为模式生物的优点 | 第19-21页 |
| 1.4.1 斑马鱼简介 | 第19-20页 |
| 1.4.2 斑马鱼胚胎发育模式 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第2章 材料和方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 斑马鱼 | 第22页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第22页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第22-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-42页 |
| 2.2.1 目的片段的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.2 目的片段的回收 | 第26-27页 |
| 2.2.3 目的片段与载体的连接 | 第27页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第27-29页 |
| 2.2.5 质粒的酶切验证 | 第29页 |
| 2.2.6 线性化质粒模板 | 第29-30页 |
| 2.2.7 探针的转录合成 | 第30页 |
| 2.2.8 纯化RNA探针 | 第30-31页 |
| 2.2.9 斑马鱼胚胎收集以及模拟微重力处理 | 第31页 |
| 2.2.10 斑马鱼胚胎原位杂交实验 | 第31-35页 |
| 2.2.11 模拟微重力对细胞周期的影响 | 第35-37页 |
| 2.2.12 斑马鱼胚胎细胞(ZF4)的培养 | 第37-38页 |
| 2.2.13 斑马鱼胚胎细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.14 RNA反转成cDNA | 第38-40页 |
| 2.2.15 实时荧光定量PCR引物的设计与验证 | 第40-42页 |
| 2.3 技术路线 | 第42-43页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第43-60页 |
| 3.1 斑马鱼胚胎cep135基因的整体原位杂交 | 第43-48页 |
| 3.1.1 斑马鱼中cep135 DIG-labeling RNA探针的制备 | 第43-46页 |
| 3.1.2 斑马鱼胚胎cep135基因的整体原位杂交及数据分析 | 第46-48页 |
| 3.2 cep135基因在斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式 | 第48-50页 |
| 3.3 模拟微重力对斑马鱼胚胎中cep135基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 模拟微重力对斑马鱼胚胎细胞ZF4周期的影响 | 第51-60页 |
| 3.4.1 模拟微重力前细胞准备 | 第51-52页 |
| 3.4.2 模拟微重力对斑马鱼胚胎细胞ZF4周期的影响 | 第52-55页 |
| 3.4.3 模拟微重力处理对ZF4细胞G2/M期调控基因表达的影响 | 第55-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录A cep135特异性片段序列 | 第67-68页 |
| 附录B cep135荧光信号数值统计 | 第68-70页 |
| 附录C 模拟微重力对ZF4细胞周期的影响 | 第70-73页 |
| 攻读学位期间公开发表论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
