| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 引言 | 第11-15页 |
| 1 疱疹病毒膜融合的机理 | 第11-12页 |
| 2 疱疹病毒的gH/gL复合物 | 第12-13页 |
| 3 疱疹病毒gL蛋白的特点 | 第13页 |
| 4 疱疹病毒gL蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 5 展望 | 第14页 |
| 6 本研究目的和意义 | 第14-15页 |
| 第二部分 试验研究 | 第15-54页 |
| 1 试验材料 | 第15-19页 |
| 1.1 DPV UL1基因序列与偏爱性数据 | 第15-16页 |
| 1.2 毒株、菌株、抗体、质粒、引物、细胞 | 第16页 |
| 1.3 试验动物 | 第16页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第16页 |
| 1.5 主要试剂及配制 | 第16-19页 |
| 1.5.1 主要试剂 | 第16-17页 |
| 1.5.2 试剂配制 | 第17-19页 |
| 2 试验方法 | 第19-31页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 2.2 鸭瘟病毒UL1基因克隆、原核表达、蛋白纯化及多抗制备 | 第20-27页 |
| 2.2.1 DPV基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 DPV UL1基因的PCR扩增与T克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.3 感受态细胞制备 | 第22页 |
| 2.2.4 感受态细胞的转化 | 第22-23页 |
| 2.2.5 T克隆的鉴定 | 第23页 |
| 2.2.6 重组原核表达质粒pET32a(+)-gLt的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.7 重组原核表达质粒pET32a(+)-gLt的表达 | 第24页 |
| 2.2.8 重组gLt蛋白的制备与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.9 重组gLt蛋白的透析与冻干 | 第25页 |
| 2.2.10 Western Blot法检测重组gLt蛋白的反应原性 | 第25-26页 |
| 2.2.11 制备兔抗重组gLt蛋白多克隆抗体 | 第26页 |
| 2.2.12 琼脂双向扩散法检测抗体效价 | 第26-27页 |
| 2.2.13 饱和硫酸铵盐析沉淀法粗提IgG | 第27页 |
| 2.2.14 High Q阴离子交换层析法纯化IgG | 第27页 |
| 2.2.15 兔抗gLt蛋白IgG的纯度鉴定 | 第27页 |
| 2.3 鸭瘟病毒UL1蛋白在感染DEF内的定位分析 | 第27-28页 |
| 2.3.1 间接免疫荧光法检测方法的建立 | 第27-28页 |
| 2.3.2 间接免疫荧光法检测方法的优化 | 第28页 |
| 2.3.3 特异性检测 | 第28页 |
| 2.3.4 结果判定 | 第28页 |
| 2.3.5 UL1蛋白在DEF内定位的动态分析 | 第28页 |
| 2.4 鸭瘟病毒UL1基因类型的分析与表达时相分析 | 第28-29页 |
| 2.4.1 DPV UL1基因在病毒感染DEF细胞中的表达时相分析 | 第28-29页 |
| 2.4.2 药物抑制试验鉴定DPV UL1基因类型 | 第29页 |
| 2.5 免疫荧光双标研究DPV UL1蛋白与gH蛋白的相互作用 | 第29-31页 |
| 2.5.1 DPV UL1基因真核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.5.2 重组质粒pCMV-HA-gH和pCMV-Myc-gL共转染HEK293细胞 | 第30-31页 |
| 2.5.3 免疫荧光双标 | 第31页 |
| 3 试验结果 | 第31-47页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第31-38页 |
| 3.1.1 DPV UL1基因核酸序列分析 | 第31-32页 |
| 3.1.2 DPV UL1蛋白氨基酸组分分析 | 第32页 |
| 3.1.3 DPV UL1蛋白质的保守结构域 | 第32页 |
| 3.1.4 DPV UL1蛋白氨基酸序列的多序列比对与进化树分析 | 第32-34页 |
| 3.1.5 DPV UL1蛋白的信号肽预测 | 第34页 |
| 3.1.6 DPV UL1蛋白的跨膜区预测 | 第34页 |
| 3.1.7 DPV UL1蛋白功能位点预测 | 第34-35页 |
| 3.1.8 DPV UL1蛋白疏水性分析 | 第35页 |
| 3.1.9 DPV UL1蛋白磷酸化位点预测 | 第35页 |
| 3.1.10 DPV UL1蛋白糖基化位点预测 | 第35-36页 |
| 3.1.11 DPV UL1蛋白的B抗原表位分析 | 第36页 |
| 3.1.12 DPV UL1蛋白的二级结构预测 | 第36页 |
| 3.1.13 DPV UL1蛋白的亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 3.1.14 DPV UL1蛋白的密码子偏嗜性分析 | 第37-38页 |
| 3.2 鸭瘟病毒UL1基因克隆、原核表达、蛋白纯化及多抗制备 | 第38-43页 |
| 3.2.1 DPV UL1截段基因gLt的扩增、T克隆及亚克隆的构建 | 第38页 |
| 3.2.2 重组原核质粒pET32a(+)-gLt的表达条件优化 | 第38-41页 |
| 3.2.3 重组gLt蛋白的纯化 | 第41页 |
| 3.2.4 Western blot检测gLt重组蛋白的反应原性 | 第41页 |
| 3.2.5 兔抗重组蛋白gLt血清的效价检测以及纯化 | 第41-43页 |
| 3.3 鸭瘟病毒UL1蛋白在感染DEF内的定位分析 | 第43-45页 |
| 3.3.1 间接免疫荧光法检测方法的条件优化 | 第43页 |
| 3.3.2 特异性检测 | 第43页 |
| 3.3.3 DPV UL1蛋白在病毒感染细胞中的动态分布 | 第43-45页 |
| 3.4 鸭瘟病毒UL1基因类型的分析与表达时相分析 | 第45-46页 |
| 3.4.1 DPV UL1基因在病毒感染细胞中的表达时相分析 | 第45页 |
| 3.4.2 琼脂糖凝胶电泳检测RNA样品的完整 | 第45页 |
| 3.4.3 药物抑制试验确定UL1基因类型 | 第45-46页 |
| 3.5 免疫荧光双标研究DPV UL1蛋白与gH蛋白的相互作用 | 第46-47页 |
| 3.5.1 真核表达载体pCMV-Myc-gL的鉴定 | 第46页 |
| 3.5.2 DPV UL1蛋白与gH蛋白在HEK293细胞内的共定位 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-54页 |
| 4.1 生物信息学分析 | 第47-50页 |
| 4.1.1 DPV UL1基因及其编码蛋白的分子特性 | 第47-49页 |
| 4.1.2 DPV UL1基因编码蛋白的遗传特性和同源性 | 第49页 |
| 4.1.3 DPV UL1基因密码子偏嗜性研究 | 第49-50页 |
| 4.2 鸭瘟病毒UL1基因克隆、原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备 | 第50-51页 |
| 4.3 鸭瘟病毒UL1基因编码蛋白在感染DEF内的定位分析 | 第51-52页 |
| 4.4 鸭瘟病毒UL1基因类型的分析与表达时相分析 | 第52页 |
| 4.5 鸭瘟病毒UL1蛋白与gH蛋白在HEK293细胞内的共定位 | 第52-54页 |
| 第三部分 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
