中文摘要 | 第4-7页 |
abstract | 第7-9页 |
英文缩略词表 | 第13-14页 |
第1章 绪论 | 第14-32页 |
1.1 MicroRNAs | 第14-17页 |
1.1.1 MiRNAs 的发现 | 第14-15页 |
1.1.2 MiRNAs 的合成、转录与作用 | 第15-16页 |
1.1.3 miRNA 的变异 | 第16-17页 |
1.1.4 MiRNA 的研究方法 | 第17页 |
1.2 miRNA 在结肠直肠癌中的研究 | 第17-26页 |
1.2.1 MiRNA 与结肠直肠癌的发生 | 第17-20页 |
1.2.2 miRNA 与结肠直肠癌的转移 | 第20-22页 |
1.2.3 miRNA 与遗传性结肠直肠癌 | 第22-23页 |
1.2.4 miRNA 与结肠直肠癌的诊断 | 第23-25页 |
1.2.5 miRNA 与结肠直肠癌化疗 | 第25-26页 |
1.2.6 miRNA与结肠直肠癌的预后 | 第26页 |
1.3 MiR-378 与癌症 | 第26-28页 |
1.4 CDC40 的作用 | 第28-29页 |
1.5 结肠直肠癌药物奥沙利铂 | 第29-31页 |
1.6 研究假设 | 第31页 |
1.7 研究路线 | 第31-32页 |
第2章 实验材料与方法 | 第32-54页 |
2.1 实验材料 | 第32-36页 |
2.1.1 组织及血清样本 | 第32页 |
2.1.2 细胞系 | 第32页 |
2.1.3 实验用鼠 | 第32页 |
2.1.4 主要试剂 | 第32-35页 |
2.1.5 主要实验仪器 | 第35-36页 |
2.2 实验方法 | 第36-53页 |
2.2.1 细胞培养 | 第36页 |
2.2.2 RNA 提取、反转录和实时定量 PCR | 第36-37页 |
2.2.3 反转录及实时荧光定量 PCR 检测 | 第37-39页 |
2.2.4 MiRNA 及 siRNA 转染 | 第39页 |
2.2.5 Western Blotting | 第39-42页 |
2.2.6 克隆形成实验 | 第42-43页 |
2.2.7 MTT 活性检测 | 第43页 |
2.2.8 流式检测细胞周期 | 第43-44页 |
2.2.9 Annexin-V/7-AAD 凋亡检测 | 第44-45页 |
2.2.10 质粒构建 | 第45-48页 |
2.2.11 双荧光素酶报告分析系统 | 第48-49页 |
2.2.12 过表达 CDC40 | 第49页 |
2.2.13 原位末端标记法(TUNNEL)检测细胞凋亡 | 第49-50页 |
2.2.14 裸鼠成瘤步骤 | 第50-51页 |
2.2.15 组织免疫组化 | 第51-53页 |
2.3 数据分析 | 第53-54页 |
第3章 实验结果 | 第54-74页 |
3.1 miR-378 在人类结肠直肠癌中的表达及生物学意义 | 第54-58页 |
3.1.1 MiR-378 在结肠直肠癌组织及细胞中的表达 | 第54-56页 |
3.1.2 过表达 miR-378 抑制细胞生长 | 第56-57页 |
3.1.3 过表达 miR-378 阻抑结肠直肠癌细胞周期的进程 | 第57-58页 |
3.2 miR-378 通过 CDC40 调节结肠直肠癌细胞的生长及周期 | 第58-69页 |
3.2.1 靶基因鉴定 | 第58-59页 |
3.2.2 过表达miR-378抑制 CDC40的蛋白和 mRNA的 表达 | 第59-60页 |
3.2.3 miR-378 靶向结合 CDC40 mRNA 的 3’UTR | 第60-62页 |
3.2.4 siRNA 抑制 CDC40 蛋白及 RNA 水平 | 第62-63页 |
3.2.5 敲减 CDC40 抑制细胞生长及周期 | 第63-65页 |
3.2.6 过表达 CDC40 恢复 CDC40 的表达水平 | 第65-66页 |
3.2.7 miR-378 通过 CDC40 调控细胞生长 | 第66-67页 |
3.2.8 结肠直肠癌组织中 miR-378 与 CDC40 的表达反相关 | 第67-69页 |
3.3 过表达 miR-378 提高 L-OHP 诱导的凋亡 | 第69-72页 |
3.3.1 过表达 miR-378 对凋亡无显著性影响 | 第69-70页 |
3.3.2 过表达 miR-378 提高 L-OHP 对细胞的抑制 | 第70-71页 |
3.3.3 过表达 miR-378 提高 L-OHP 诱导的凋亡 | 第71-72页 |
3.4 体内动物实验验证 miR-378 对直肠结肠癌细胞生长的影响 | 第72-74页 |
3.4.1 过表达 miR-378 抑制肿瘤的生长 | 第72-74页 |
第4章 讨论 | 第74-78页 |
第5章 结论 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-91页 |
综述 | 第91-100页 |
参考文献 | 第96-100页 |
作者简介及在读期间科研成果 | 第100-102页 |
致谢 | 第102页 |