| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 DEHP的结构及理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.1 DEHP的结构 | 第13-14页 |
| 1.2.2 DEHP的理化性质 | 第14页 |
| 1.3 DEHP在环境中的污染状况 | 第14-16页 |
| 1.3.1 DEHP在土壤中的分布 | 第14-15页 |
| 1.3.2 DEHP在水体和污泥中的分布 | 第15页 |
| 1.3.3 DEHP在大气中的分布 | 第15页 |
| 1.3.4 DEHP在生物体内的富集 | 第15-16页 |
| 1.4 DEHP的毒性作用 | 第16-17页 |
| 1.4.1 DEHP对肝脏,肾脏,心脏的影响 | 第16页 |
| 1.4.2 DEHP的神经系统的影响 | 第16-17页 |
| 1.4.3 DEHP的生殖发育毒性 | 第17页 |
| 1.5 DEHP在自然环境中的降解 | 第17-19页 |
| 1.5.1 DEHP的水解 | 第17页 |
| 1.5.2 DEHP的光解 | 第17-18页 |
| 1.5.3 DEHP的真菌降解 | 第18页 |
| 1.5.4 DEHP的细菌降解 | 第18-19页 |
| 1.6 DEHP降解途径及相关的基因 | 第19-23页 |
| 1.6.1 DEHP的降解途径 | 第19-20页 |
| 1.6.2 PAEs水解酶基因 | 第20-21页 |
| 1.6.3 pht基因簇 | 第21-22页 |
| 1.6.4 pcm基因簇 | 第22-23页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.2 主要器材 | 第24-25页 |
| 2.1.3 菌种的来源与质粒 | 第25页 |
| 2.1.4 主要培养基及其配置 | 第25页 |
| 2.1.5 常用缓冲液及其配置 | 第25-26页 |
| 2.1.6 PCR引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 菌株的分离纯化 | 第27页 |
| 2.2.2 菌株的形态观察 | 第27页 |
| 2.2.3 生理生化鉴定 | 第27页 |
| 2.2.4 菌株HS-NH1基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.5 菌株HS-NH1的16S rRNA基因序列测定及分子系统发育树的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.6 菌株HS-NH1的gyrB基因序列测定及分子系统发育树的构建 | 第28页 |
| 2.2.7 菌株的生长与降解特性研究 | 第28页 |
| 2.2.8 底物广谱性分析 | 第28-29页 |
| 2.2.9 DEHP代谢中间产物检测 | 第29页 |
| 2.2.10 基因组DNA的扫描测序及分析 | 第29页 |
| 2.2.11 菌株HS-NH1总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.12 反转录PCR | 第30页 |
| 2.2.13 pht基因簇的克隆 | 第30页 |
| 2.2.14 pht基因簇的原核表达 | 第30-31页 |
| 2.2.15 pht基因簇原核表达产物活性测定 | 第31-32页 |
| 2.2.16 分析方法 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-51页 |
| 3.1 DEHP降解菌的分离与纯化 | 第33页 |
| 3.2 菌株HS-NH1的形态学与生理生化鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 菌株HS-NH1分子鉴定 | 第34-36页 |
| 3.3.1 菌株HS-NH1 16S rRNA基因系统发育学分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 菌株HS-NH1 gyrB基因系统发育学分析 | 第35-36页 |
| 3.4 菌株HS-NH1的生长与降解特性 | 第36-38页 |
| 3.4.1 DEHP标准品的检测及标准曲线 | 第36页 |
| 3.4.2 温度对菌株HS-NH1生长及DEHP降解率的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.3 初始pH值对菌株HS-NH1生长及DEHP降解率的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 菌株HS-NH1底物广谱性分析 | 第38-39页 |
| 3.6 DEHP代谢中间产物检测 | 第39页 |
| 3.7 菌株HS-NH1基因组扫描分析 | 第39-44页 |
| 3.7.1 pht基因簇 | 第40-42页 |
| 3.7.2 pcm基因簇 | 第42-43页 |
| 3.7.3 ABC转运蛋白和MFS转运蛋白基因 | 第43-44页 |
| 3.7.4 PAEs水解酶基因 | 第44页 |
| 3.8 反转录PCR分析pht基因簇在菌株HS-NH1中的转录 | 第44-45页 |
| 3.9 phtAab、phtAcd、phtB、phtC的分子克隆与表达 | 第45-51页 |
| 3.9.1 phtAab、phtAcd、phtB、phtC的分子克隆 | 第45-46页 |
| 3.9.2 牛血清蛋白浓度标准曲线 | 第46页 |
| 3.9.3 PA标准品的HPLC检测及其标准曲线 | 第46-47页 |
| 3.9.4 phtAab、phtAcd在E.coli BL21中的表达及其产物活性分析 | 第47-48页 |
| 3.9.5 phtB、phtC在E.coli BL21中的表达及其产物活性分析 | 第48-51页 |
| 讨论 | 第51-57页 |
| 总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 硕士期间发表论文 | 第64-65页 |
| 衷心感谢以下基金资助 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
