| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第1章 绪论 | 第15-19页 |
| 第2章 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1 质粒、菌株和血清 | 第19页 |
| 2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.3 实验动物 | 第20页 |
| 2.4 实验设备 | 第20-21页 |
| 2.5 配置培养基 | 第21-23页 |
| 第3章 实验方法 | 第23-37页 |
| 3.1 EBG的制备与鉴定 | 第23-25页 |
| 3.1.1 裂解质粒pHH43转化与鉴定 | 第23-24页 |
| 3.1.2 EBG的制备 | 第24页 |
| 3.1.3 裂解率的计算 | 第24页 |
| 3.1.4 EBG鉴定 | 第24-25页 |
| 3.2 Tp0751膜锚定载体构建、表达与鉴定 | 第25-29页 |
| 3.2.1 PCR扩增膜锚定序列E'-linker | 第25-26页 |
| 3.2.2 pET28a-E'-Tp0751表达载体构建 | 第26-28页 |
| 3.2.3 E'-Tp0751融合蛋白在E. coli BL21中的表达 | 第28-29页 |
| 3.2.4 E'-Tp0751融合蛋白的Western blot鉴定 | 第29页 |
| 3.3 重组Tp0751菌影制备与鉴定 | 第29-33页 |
| 3.3.1 重组质粒pET32a-E-box的构建 | 第29-31页 |
| 3.3.2 重组质粒pET28a-E'-Tp0751 -E-box的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.3 重组Tp0751菌影诱导表达条件摸索 | 第32页 |
| 3.3.3.1 不同起始OD600值进行诱导的蛋白表达和裂解效率的计算 | 第32页 |
| 3.3.3.2 不同诱导持续时间的蛋白表达和裂解效率的计算 | 第32页 |
| 3.3.4 重组Tp0751菌影中Tp0751蛋白的表达与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.5 重组Tp0751菌影透射电镜（TEM）鉴定 | 第33页 |
| 3.4 重组Tp0751菌影免疫活性 | 第33-37页 |
| 3.4.1 免疫原 | 第33-34页 |
| 3.4.2 动物分组与免疫接种 | 第34页 |
| 3.4.3 免疫活性检测 | 第34-36页 |
| 3.4.3.1 ELISA法检测血清特异性IgG抗体 | 第34-35页 |
| 3.4.3.2 ELISA法检测小鼠生殖道灌洗液特异性sIgA抗体 | 第35页 |
| 3.4.3.3 小鼠脾淋巴细胞采集及CCK-8 淋巴细胞增殖实验 | 第35页 |
| 3.4.3.4 间接ELISA检测小鼠脾细胞IFN-γ 相对表达水平 | 第35-36页 |
| 3.4.4 统计学处理 | 第36-37页 |
| 第4章 实验结果 | 第37-51页 |
| 4.1 E. coli DH5α 菌影制备与鉴定 | 第37-39页 |
| 4.1.1 质粒pHH43的鉴定 | 第37页 |
| 4.1.2 重组E. coli DH5α(pHH43)热诱导曲线 | 第37-38页 |
| 4.1.3 裂解率计算 | 第38页 |
| 4.1.4 E. coli DH5α 菌影电泳鉴定 | 第38页 |
| 4.1.5 EBG透射电镜(TEM)观察 | 第38-39页 |
| 4.2 Tp0751膜锚定载体构建 | 第39-42页 |
| 4.2.1 PCR扩增E'-Linker基因 | 第39-40页 |
| 4.2.2 重组pET28a-E'-Tp0751表达载体构建 | 第40页 |
| 4.2.3 E'-Tp0751基因的序列分析 | 第40-41页 |
| 4.2.4 重组蛋白的诱导表达 | 第41-42页 |
| 4.2.5 重组蛋白Western Blot鉴定结果 | 第42页 |
| 4.3 重组Tp0751菌影制备 | 第42-45页 |
| 4.3.1. 重组质粒pET32a-E-box与pET28a-E'-Tp0751-E-box构建与鉴定 | 第42-43页 |
| 4.3.2 裂解基因E基因的序列分析 | 第43-44页 |
| 4.3.3 SDS-PAGE检测重组菌影中Tp0751蛋白的表达 | 第44页 |
| 4.3.4 Western Blot鉴定重组菌影中Tp0751蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 4.3.5 重组EBG的制备及裂解率的计算 | 第45页 |
| 4.3.6 透射电镜观察重组EBG | 第45页 |
| 4.4 重组Tp0751菌影免疫活性 | 第45-51页 |
| 4.4.1 血清特异性IgG水平 | 第45-46页 |
| 4.4.2 小鼠生殖道灌洗液sIgA水平 | 第46-47页 |
| 4.4.3 CCK-8 法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况 | 第47-48页 |
| 4.4.4 间接ELISA检测重组菌影中Tp0751蛋白诱导小鼠脾淋巴细胞产IFN-γ 表达水平 | 第48-51页 |
| 第5章 讨论 | 第51-57页 |
| 第6章 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附图 | 第63-65页 |
| 文献综述 | 第65-75页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 攻读硕士期间主要研究成果 | 第75-77页 |
| 本研究受以下项目资金资助 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
