| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| 1 RNAi的发现 | 第14-15页 |
| 2 RNAi的分类和机制 | 第15-20页 |
| 2.1 细胞自主型RNAi | 第16-19页 |
| 2.2 非细胞自主型RNAi | 第19-20页 |
| 3 RNAi机制的生理功能 | 第20页 |
| 4 RNAi的应用现状及进展 | 第20-22页 |
| 5 RNAi在昆虫中的应用 | 第22-26页 |
| 5.1 RNAi在昆虫基因功能研究中的作用 | 第22-23页 |
| 5.2 RNAi在害虫防治中的应用 | 第23-26页 |
| 5.2.1 显微注射法RNAi在害虫防治中的应用 | 第23页 |
| 5.2.2 饲喂法RNAi在害虫防治中的应用 | 第23-25页 |
| 5.2.3 转基因作物RNAi在害虫防治中的应用 | 第25页 |
| 5.2.4 滴注法RNAi在害虫防治中的应用 | 第25-26页 |
| 6 目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 橘小实蝇饲喂法RNAi体系建立 | 第27-59页 |
| 1 材料与方法 | 第27-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 1.1.1 供试昆虫 | 第27-28页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第28页 |
| 1.1.3 常用缓冲液、培养基及抗生素的配制 | 第28-30页 |
| 1.1.4 菌株和质粒 | 第30页 |
| 1.1.5 主要试剂及试剂盒 | 第30-31页 |
| 1.2 实验方法 | 第31-40页 |
| 1.2.1 橘小实蝇总RNA提取 | 第31-32页 |
| 1.2.2 简并引物和特异性引物设计 | 第32页 |
| 1.2.3 rpl19和V-ATP-D基因克隆 | 第32-34页 |
| 1.2.4 rpl19和V-ATP-D dsRNA表达和提取 | 第34-36页 |
| 1.2.5 生测方法 | 第36-38页 |
| 1.2.6 荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 1.2.7 数据分析 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-57页 |
| 2.1 rpl19和V-ATP-D序列克隆及分析 | 第40-42页 |
| 2.1.1 橘小实蝇总RNA提取 | 第40页 |
| 2.1.2 目标基因扩增结果 | 第40-41页 |
| 2.1.3 rpl19和V-ATP-D序列分析 | 第41-42页 |
| 2.2 dsRNA表达载体构建及dsRNA提取 | 第42-44页 |
| 2.3 菌液喂食可行性检测和dsRNA稳定性检测 | 第44-45页 |
| 2.4 内参基因筛选以及荧光定量扩增效率确认 | 第45-48页 |
| 2.5 dsRNA饲喂法和菌液饲喂法均可以下调靶标基因表达水平 | 第48-50页 |
| 2.6 RNAi效应组织特异性分析 | 第50-53页 |
| 2.7 长期喂食RNAi效应检测 | 第53-54页 |
| 2.8 F2代橘小实蝇RNAi效应检测 | 第54-56页 |
| 2.9 不同浓度rpl19 dsRNA喂食RNAi效应检测 | 第56-57页 |
| 2.10 不同虫龄橘小实蝇成虫喂食RNAi效应检测 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 基于RNAi技术的spr基因功能研究 | 第59-77页 |
| 1 材料与方法 | 第61-67页 |
| 1.1 实验材料 | 第61页 |
| 1.1.1 供试昆虫 | 第61页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第61页 |
| 1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第61页 |
| 1.2 实验方法 | 第61-67页 |
| 1.2.1 总RNA提取 | 第61页 |
| 1.2.2 spr基因全长克隆及序列分析 | 第61-66页 |
| 1.2.3 荧光定量PCR | 第66页 |
| 1.2.4 生测方法 | 第66-67页 |
| 1.2.5 RNAi研究spr功能 | 第67页 |
| 1.2.6 数据分析 | 第67页 |
| 2 结果及分析 | 第67-75页 |
| 2.1 spr基因克隆及序列分析 | 第67-70页 |
| 2.2 橘小实蝇spr表达谱分析 | 第70页 |
| 2.3 橘小实蝇雌虫交配后TOR信号通路上调 | 第70-72页 |
| 2.4 交配降低橘小实蝇雌虫抗氧化胁迫能力 | 第72-73页 |
| 2.5 spr调控交配后雌虫抗氧化胁迫能力变化 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 第四章 基于RNAi技术的橘小实蝇共生病毒功能研究 | 第77-87页 |
| 1 材料与方法 | 第78-80页 |
| 1.1 实验材料 | 第78页 |
| 1.1.1 供试昆虫 | 第78页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第78页 |
| 1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第78页 |
| 1.2 实验方法 | 第78-80页 |
| 1.2.1 总RNA提取 | 第78页 |
| 1.2.2 总DNA提取 | 第78-79页 |
| 1.2.3 病毒序列注释 | 第79页 |
| 1.2.4 Bdv-1 RNAi | 第79页 |
| 1.2.5 肠道细菌荧光定量PCR计数和菌落计数 | 第79页 |
| 1.2.6 数据分析 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-85页 |
| 2.1 转录组测序发现8条病毒序列 | 第80-81页 |
| 2.2 病毒片段的表达谱 | 第81-83页 |
| 2.3 Bdv-1与橘小实蝇肠道微生物稳态有关 | 第83-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第五章 橘小实蝇对RNAi的免疫耐受及其机理研究 | 第87-116页 |
| 1 材料与方法 | 第87-95页 |
| 1.1 实验材料 | 第87-88页 |
| 1.1.1 供试昆虫 | 第87页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第87-88页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第88页 |
| 1.2 实验方法 | 第88-95页 |
| 1.2.1 dsRNA制备 | 第88-91页 |
| 1.2.2 喂食生测方法 | 第91-92页 |
| 1.2.3 H_2O_2解除橘小实蝇对RNAi的免疫耐受实验 | 第92-93页 |
| 1.2.4 数字基因表达谱 | 第93页 |
| 1.2.5 显微注射 | 第93页 |
| 1.2.6 cy3荧光标记dsRNA | 第93-94页 |
| 1.2.7 组织培养 | 第94页 |
| 1.2.8 免疫荧光染色 | 第94-95页 |
| 1.2.9 荧光定量PCR | 第95页 |
| 1.2.10 数据分析 | 第95页 |
| 2 结果及分析 | 第95-114页 |
| 2.1 喂食非靶标基因dsRNA的RNAi效应 | 第95-97页 |
| 2.2 喂食靶标基因dsRNA引起橘小实蝇RNAi免疫耐受 | 第97-102页 |
| 2.3 RNAi免疫耐受不具备基因特异性 | 第102页 |
| 2.4 不同浓度靶标基因dsRNA的免疫耐受效果 | 第102-103页 |
| 2.5 胞吞机制受阻导致橘小实蝇对RNAi免疫耐受 | 第103-108页 |
| 2.6 免疫耐受橘小实蝇差异表达基因 | 第108-113页 |
| 2.7 双氧水促进胞吞机制从而打破免疫耐受 | 第113-114页 |
| 3 讨论 | 第114-116页 |
| 第六章 结论与展望 | 第116-119页 |
| 1 结论 | 第116-117页 |
| 2 创新点 | 第117页 |
| 3 展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-135页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
