| 缩写表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 番鸭呼肠孤病毒的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1 病原结构 | 第13-14页 |
| 2 干扰素信号通路研究简介 | 第14-20页 |
| 2.1 细胞因子简介 | 第14页 |
| 2.2 干扰素 | 第14-17页 |
| 2.2.1 Ⅰ型干扰素 | 第15-16页 |
| 2.2.2 Ⅲ型干扰素 | 第16-17页 |
| 2.3 ISGs及其抗病毒作用 | 第17-20页 |
| 2.3.1 IFITM家族 | 第17-18页 |
| 2.3.2 ISG15蛋白 | 第18-20页 |
| 3 抗病毒天然免疫 | 第20-23页 |
| 3.1 TLRs介导的信号通路 | 第21-22页 |
| 3.2 RLRs介导的信号通路 | 第22-23页 |
| 4 慢病毒载体介导的RNA干扰技术研究进展 | 第23-26页 |
| 4.1 慢病毒载体介导的RNA干扰 | 第24-25页 |
| 4.1.1 慢病毒载体的构建 | 第24-25页 |
| 4.1.2 慢病毒载体介导的RNA干扰的作用机制 | 第25页 |
| 4.2 慢病毒载体介导RNA干扰在基因治疗中的应用 | 第25-26页 |
| 4.2.1 抗病毒感染 | 第25页 |
| 4.2.2 癌症治疗 | 第25-26页 |
| 4.2.3 遗传疾病治疗 | 第26页 |
| 4.3 小结 | 第26页 |
| 5 本课题研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 MDRV感染诱导宿主天然免疫反应的机理研究 | 第27-54页 |
| 1 实验材料 | 第27-30页 |
| 1.1 菌株 | 第27页 |
| 1.2 细胞 | 第27页 |
| 1.3 质粒 | 第27页 |
| 1.4 病毒 | 第27页 |
| 1.5 实验动物及鸭胚 | 第27页 |
| 1.6 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.7 主要实验仪器 | 第28页 |
| 1.8 引物序列 | 第28-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.1 细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.1.1 贴壁细胞传代 | 第30页 |
| 2.1.2 贴壁细胞冻存 | 第30页 |
| 2.1.3 细胞复苏 | 第30-31页 |
| 2.1.4 MDEF细胞原代培养 | 第31页 |
| 2.2 MDRV的扩增与感染 | 第31-32页 |
| 2.2.1 病毒扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.2 病毒感染 | 第32页 |
| 2.2.3 MDRV半数组织细胞感染量TCID_(50)的测定 | 第32页 |
| 2.3 免疫印迹(Western blot) | 第32-34页 |
| 2.3.1 蛋白样品的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 电泳 | 第33页 |
| 2.3.3 转膜、封闭 | 第33-34页 |
| 2.3.4 抗体孵育 | 第34页 |
| 2.3.5 化学发光检测 | 第34页 |
| 2.4 RT-PCR法和荧光定量法检测目的基因mRNA的相对表达量 | 第34-36页 |
| 2.4.1 RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.4.2 反转录 | 第35页 |
| 2.4.3 RT-PCR | 第35-36页 |
| 2.4.4 Real-time PCR | 第36页 |
| 2.5 制备感受态菌体(CaCl_2法) | 第36-37页 |
| 2.6 质粒转化 | 第37页 |
| 2.7 细胞转染 | 第37-38页 |
| 2.8 逆转录病毒包装及感染 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-52页 |
| 3.1 MDRV感染对293T细胞中干扰素及ISG表达的影响 | 第38-41页 |
| 3.2 MDRV病毒基因组RNA对293T细胞中IFNs表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.3 干扰RIG-I,MDA5,TLR3对MDRV感染诱导IFNs表达的影响 | 第43-45页 |
| 3.4 沉默Visa基因对MDRV感染诱导IFNs表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.5 干扰IRF3,IRF7基因及抑制NF-κB表达对MDRV感染诱导IFNs表达的影响 | 第46-49页 |
| 3.6 IFNs在293T和MDEF细胞中对MDRV复制的影响 | 第49-50页 |
| 3.7 MDRV感染能激活番鸭的天然免疫 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 全文总结 | 第54-56页 |
| 1 结论 | 第54页 |
| 2 创新点 | 第54页 |
| 3 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 个人履历 | 第67-68页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
