| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 课题背景 | 第9-11页 |
| 1.1.1 生物催化简介 | 第9页 |
| 1.1.2 生物催化研究概况 | 第9-10页 |
| 1.1.3 腈类化合物的生物催化 | 第10页 |
| 1.1.4 腈水解酶简介 | 第10-11页 |
| 1.2 腈水解酶的应用 | 第11-13页 |
| 1.2.1 在烟酸生物合成中的应用 | 第11页 |
| 1.2.2 在其他有机合成反应中的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.3 聚合物材料的表面修饰 | 第12-13页 |
| 1.2.4 农药降解 | 第13页 |
| 1.3 高密度发酵技术 | 第13-17页 |
| 1.3.1 高密度发酵的影响因素 | 第13-16页 |
| 1.3.2 补料策略 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题研究意义与研究内容 | 第17-19页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第17页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 腈水解酶组成型表达菌株的构建 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌种、质粒和引物 | 第19-20页 |
| 2.1.2 培养基 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂材料 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 pET-3b-NIT重组质粒的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.2 在大肠杆菌中的重组表达 | 第24页 |
| 2.2.3 pMA5-NIT重组质粒的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.4 在枯草芽孢杆菌中的重组表达 | 第26-27页 |
| 2.2.5 分析方法 | 第27-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-33页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第29页 |
| 2.3.2 pET-3b-NIT重组质粒的构建及表达 | 第29-31页 |
| 2.3.3 pMA5-NIT重组质粒的构建及表达 | 第31-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 重组大肠杆菌的高密度发酵培养 | 第35-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 菌株 | 第35页 |
| 3.1.2 培养基 | 第35-36页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第36页 |
| 3.1.4 主要仪器及设备 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 菌种活化 | 第36页 |
| 3.2.2 种子液制备 | 第36页 |
| 3.2.3 重组菌罐上发酵策略 | 第36-37页 |
| 3.2.4 分析方法 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第38-42页 |
| 3.3.1 分批发酵 | 第38-39页 |
| 3.3.2 恒速补料发酵 | 第39-40页 |
| 3.3.3 pH-stat补料发酵 | 第40-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 重组腈水解酶在烟酸合成中的应用 | 第43-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 菌株 | 第43页 |
| 4.1.2 培养基 | 第43页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第43页 |
| 4.1.4 主要仪器及设备 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 重组菌静息细胞的制备 | 第44页 |
| 4.2.2 催化性质考察 | 第44-45页 |
| 4.2.3 生物转化实验 | 第45页 |
| 4.2.4 分析方法 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第46-55页 |
| 4.3.1 重组腈水解酶的催化性质 | 第46-51页 |
| 4.3.2 生物转化合成烟酸 | 第51-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第五章 结论与展望 | 第57-61页 |
| 5.1 主要结论 | 第57-58页 |
| 5.2 展望 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第68页 |