| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 表达系统概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 原核表达系统 | 第12-14页 |
| 1.1.2 真核表达系统 | 第14-15页 |
| 1.2 表达系统优化 | 第15-19页 |
| 1.2.1 表达宿主 | 第15-16页 |
| 1.2.2 载体 | 第16页 |
| 1.2.3 启动子 | 第16-18页 |
| 1.2.4 信号肽 | 第18-19页 |
| 1.3 群体感应系统 | 第19页 |
| 1.4 高细胞密度发酵 | 第19-21页 |
| 1.4.1 高细胞密度发酵培养环境的优化 | 第20页 |
| 1.4.2 高细胞密度发酵培养模式优化 | 第20-21页 |
| 1.5 课题研究背景，内容及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌高效分泌表达系统构建 | 第22-42页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第23-25页 |
| 2.2.3 培养基和缓冲液 | 第25页 |
| 2.2.4 DNA操作 | 第25-26页 |
| 2.2.5 载体构建 | 第26-30页 |
| 2.2.6 枯草芽孢杆菌感受态制备与转化 | 第30页 |
| 2.2.7 重组氨肽酶的表达 | 第30页 |
| 2.2.8 酶活检测 | 第30页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-41页 |
| 2.3.1 单启动子表达载体构建 | 第30-32页 |
| 2.3.2 单启动子表达载体表达AP | 第32-36页 |
| 2.3.3 串联启动子表达AP | 第36-37页 |
| 2.3.4 启动子P_(HpaII)-P_(gsiB)表达AP分析 | 第37页 |
| 2.3.5 信号肽库的构建 | 第37-40页 |
| 2.3.6 高效分泌表达系统发酵实验 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 细胞密度依赖型自诱导表达系统的构建 | 第42-58页 |
| 3.1 前言 | 第42-43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-49页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第43-44页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第44页 |
| 3.2.3 培养基及缓冲液 | 第44-45页 |
| 3.2.4 DNA操作 | 第45页 |
| 3.2.5 表达宿主及载体构建 | 第45-49页 |
| 3.2.6 重组蛋白的表达 | 第49页 |
| 3.2.7 酶活检测 | 第49页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE分析 | 第49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-57页 |
| 3.3.1 表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.2 表达系统的性质研究 | 第50-52页 |
| 3.3.3 表达宿主的优化 | 第52-54页 |
| 3.3.4 表达系统的优化 | 第54-56页 |
| 3.3.5 异源蛋白表达 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 细胞密度依赖型自诱导表达系统的优化及高细胞密度发酵研究 | 第58-76页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 材料与方法 | 第58-62页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第58-59页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第59页 |
| 4.2.3 培养基 | 第59页 |
| 4.2.4 DNA操作 | 第59-61页 |
| 4.2.5 重组蛋白的表达 | 第61页 |
| 4.2.6 酶活检测 | 第61-62页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE分析 | 第62页 |
| 4.2.8 发酵 | 第62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-74页 |
| 4.3.1 菌株BSG1682的构建及形态研究 | 第62-63页 |
| 4.3.2 宿主菌BSG1682表达特性 | 第63-64页 |
| 4.3.3 整合表达 | 第64-65页 |
| 4.3.4 启动子核心区优化 | 第65-66页 |
| 4.3.5 启动子串联及优化 | 第66-68页 |
| 4.3.6 异源蛋白表达 | 第68-69页 |
| 4.3.7 5L发酵罐实验 | 第69-70页 |
| 4.3.8 高细胞密度发酵试验 | 第70-74页 |
| 4.4 本章总结 | 第74-76页 |
| 第五章 链霉菌分泌表达系统的构建 | 第76-92页 |
| 5.1 前言 | 第76页 |
| 5.2 材料与方法 | 第76-85页 |
| 5.2.1 菌种与质粒 | 第76-77页 |
| 5.2.2 实验试剂及实验仪器 | 第77-78页 |
| 5.2.3 培养基和缓冲液 | 第78-79页 |
| 5.2.4 主要试剂配置 | 第79页 |
| 5.2.5 DNA遗传操作 | 第79-81页 |
| 5.2.6 重组载体构建 | 第81-83页 |
| 5.2.7 异源蛋白表达 | 第83-84页 |
| 5.2.8 酶活测定 | 第84页 |
| 5.2.9 蛋白质N端测序方法 | 第84-85页 |
| 5.2.10 SDS-PAGE电泳分析 | 第85页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第85-90页 |
| 5.3.1 表达载体的构建 | 第85-86页 |
| 5.3.2 TGase表达 | 第86页 |
| 5.3.3 SP_(tg)序列优化 | 第86-87页 |
| 5.3.4 启动子活性比较 | 第87-88页 |
| 5.3.5 多宿主表达TGase | 第88页 |
| 5.3.6 异源蛋白表达 | 第88-90页 |
| 5.4 本章小结 | 第90-92页 |
| 第六章 谷氨酰胺转氨酶的表达元件在大肠杆菌内的功能验证 | 第92-102页 |
| 6.1 前言 | 第92页 |
| 6.2 材料与方法 | 第92-96页 |
| 6.2.1 菌种与质粒 | 第92-93页 |
| 6.2.2 实验试剂及实验仪器 | 第93页 |
| 6.2.3 培养基及试剂配置 | 第93页 |
| 6.2.4 DNA遗传操作 | 第93页 |
| 6.2.5 表达载体构建 | 第93-96页 |
| 6.2.6 TGase的重组表达 | 第96页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第96-101页 |
| 6.3.1 pretgase和protgase基因的扩增及表达载体的构建 | 第96-97页 |
| 6.3.2 TGase的表达 | 第97-98页 |
| 6.3.3 SP_(tg)优化 | 第98-99页 |
| 6.3.4 信号肽筛选 | 第99-100页 |
| 6.3.5 P_(tg)功能验证 | 第100-101页 |
| 6.4 本章小结 | 第101-102页 |
| 主要结论与展望 | 第102-105页 |
| 主要结论 | 第102-103页 |
| 展望 | 第103-105页 |
| 论文创新点 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第117页 |
