| 中英文缩略词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 实验材料 | 第18-22页 |
| 一、实验试剂 | 第18-21页 |
| 二、主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 实验方法 | 第22-57页 |
| 一、食管鳞癌组织样本的收集 | 第22页 |
| 二、细胞系培养 | 第22-24页 |
| 2.1 细胞的复苏 | 第22-23页 |
| 2.2 细胞的培养和传代 | 第23页 |
| 2.3 细胞的冻存 | 第23-24页 |
| 2.4 5-aza-dc处理细胞 | 第24页 |
| 三、食管鳞癌组织和细胞系中基因组DNA和总RNA的提取 | 第24-27页 |
| 3.1 食管鳞癌组织基因组DNA提取 | 第24-25页 |
| 3.2 食管鳞癌细胞系基因组DNA提取 | 第25-26页 |
| 3.3 食管鳞癌细胞系总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 四、细胞株鉴定 | 第27页 |
| 五、RT-PCR半定量检测mRNA的表达水平 | 第27-30页 |
| 5.1 反转录生成cDNA | 第27-28页 |
| 5.2 荧光定量RT-PCR反应 | 第28-30页 |
| 六、焦磷酸盐测序 | 第30-32页 |
| 七、western blot检测蛋白的表达水平 | 第32-36页 |
| 7.1 总蛋白的提取 | 第32-33页 |
| 7.2 蛋白浓度的测定 | 第33-34页 |
| 7.3 Western Blot蛋白印迹检测蛋白表达水平 | 第34-36页 |
| 八、免疫组织化学染色 | 第36-37页 |
| 九、SiRNA转染 | 第37-38页 |
| 十、RNAi筛选 | 第38-39页 |
| 十一、构建稳转细胞系 | 第39-46页 |
| 11.1 构建CTHRC1敲降和过表达质粒 | 第39-41页 |
| 11.2 质粒的扩增与回收 | 第41-43页 |
| 11.3 慢病毒的包装 | 第43-45页 |
| 11.4 慢病毒感染目的细胞系 | 第45-46页 |
| 十二、细胞功能学实验 | 第46-49页 |
| 12.1 细胞增殖实验 | 第46页 |
| 12.2 平板克隆形成实验 | 第46-47页 |
| 12.3 细胞迁移实验 | 第47-48页 |
| 12.4 细胞侵袭实验 | 第48-49页 |
| 十三、动物实验 | 第49-53页 |
| 13.1 裸鼠皮下成瘤实验 | 第49-50页 |
| 13.2 小鼠尾静脉注射肺定植模型 | 第50-52页 |
| 13.3 石蜡包埋组织蜡块的制备 | 第52页 |
| 13.4 组织切片 | 第52-53页 |
| 13.5 石蜡切片的Hematoxylin-Eosin (HE)染色 | 第53页 |
| 十四、RNA测序法 | 第53-56页 |
| 14.1 RNA质量分析 | 第53页 |
| 14.2 上机测序 | 第53-54页 |
| 14.3 生物信息分析 | 第54-56页 |
| 十五、统计方法 | 第56-57页 |
| 实验结果 | 第57-97页 |
| 一、CTHRC1在食管鳞癌组织和细胞系中呈高表达并与细胞增殖相关 | 第57-71页 |
| 1.1 细胞的STR鉴定 | 第57-61页 |
| 1.2 食管鳞癌细胞增殖相关的癌基因的筛选 | 第61-64页 |
| 1.3 CTHRC1在食管鳞癌细胞和组织中的表达 | 第64-66页 |
| 1.4 CTHRC1的表达量与临床病理性指标的相关性 | 第66-68页 |
| 1.5 CTHRC1蛋白表达量在食管鳞癌中的预后意义 | 第68-71页 |
| 二、食管鳞癌组织和细胞中CTHRC1高表达机制的研究 | 第71-73页 |
| 三、CTHRC1对食管鳞癌细胞表型的影响 | 第73-80页 |
| 3.1 构建稳转细胞系 | 第73-74页 |
| 3.2 CTHRC1对细胞增殖的作用 | 第74-77页 |
| 3.3 CTHRC1对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响 | 第77-80页 |
| 四、CTHRC1促进食管鳞癌增殖、侵袭、转移等细胞表型的机制研究 | 第80-97页 |
| 4.1 RNA测序 | 第80-87页 |
| 4.2 在食管鳞癌细胞中CTHRC1对PI3K-Akt信号通路和MAPK信号通路的调控作用 | 第87-89页 |
| 4.3 MAPK/MEK/ERK信号通路在CTHRC1发挥的生物学功能中的作用 | 第89-91页 |
| 4.4 依赖CTHRC1激活的MAPK/MEK/ERK信号通路下游靶分子的探究 | 第91-94页 |
| 4.5 FRA-1、cyclin D1、snail1和MMP14在食管鳞癌组织中的表达量 | 第94-97页 |
| 讨论 | 第97-103页 |
| 小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-109页 |
| 基金资助 | 第109-110页 |
| 文献综述 | 第110-120页 |
| 参考文献 | 第114-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 个人简历 | 第122-123页 |
