摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略词表 | 第11-12页 |
1. 前言 | 第12-24页 |
·禾谷镰刀菌 | 第12页 |
·赤霉病 | 第12页 |
·禾谷镰刀菌毒素类型 | 第12-14页 |
·禾谷镰刀菌基因功能研究进展 | 第14-16页 |
·RNA干扰 | 第16-22页 |
·RNA干扰的发现 | 第16-17页 |
·RNA干扰的作用机制 | 第17页 |
·RNA干扰在真菌中的应用 | 第17-19页 |
·RNA干扰在植物中的应用 | 第19-21页 |
·RNA干扰的优缺点 | 第21-22页 |
·蛋白激酶C | 第22-23页 |
·研究目的及意义 | 第23-24页 |
2 材料与方法 | 第24-38页 |
·实验材料 | 第24-29页 |
·真菌菌株 | 第24页 |
·小麦材料 | 第24页 |
·质粒载体 | 第24页 |
·实验试剂及培养基 | 第24-29页 |
·实验方法 | 第29-38页 |
·序列获取 | 第29页 |
·序列脱靶分析 | 第29页 |
·FgPkc基因RNAi小片段的扩增 | 第29页 |
·酶切反应体系 | 第29页 |
·DNA连接反应体系 | 第29-30页 |
·大肠杆菌热击感受态细胞的制备 | 第30页 |
·大肠杆菌热击转化 | 第30-31页 |
·电击转化 | 第31页 |
·大肠杆菌质粒的提取—煮沸法 | 第31-32页 |
·大肠杆菌质粒的提取—碱裂解法 | 第32-33页 |
·原生质体转化 | 第33页 |
·真菌基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
·Southern杂交 | 第34-36页 |
·转化子表型实验 | 第36页 |
·转化子生长速度测定 | 第36页 |
·田间花期接种 | 第36-37页 |
·胚芽鞘接种鉴定 | 第37页 |
·分生孢子形态鉴定 | 第37-38页 |
3. 结果与分析 | 第38-50页 |
·FgPkc基因RNAi载体的构建 | 第38-40页 |
·FgPkc基因RNAi载体原生质体转化 | 第40-50页 |
·RNAi载体线性化 | 第40页 |
·原生质体转化 | 第40-41页 |
·转化子PCR鉴定 | 第41-42页 |
·Southern blot鉴定 | 第42页 |
·表型分析实验 | 第42-44页 |
·大田接种实验 | 第44-45页 |
·胚芽鞘致病率鉴定试验 | 第45-46页 |
·分生孢子形态鉴定 | 第46-47页 |
·Chs3b片段 1,2,3,5 双茎环结构植物表达载体构建 | 第47-48页 |
·FgPkc基因双茎环结构植物表达载体的构建 | 第48-50页 |
4. 讨论 | 第50-52页 |
5. 参考文献 | 第52-59页 |
6. 附录 | 第59-61页 |
7. 致谢 | 第61页 |