| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 第一节 肌肉生长抑制素(MYOSTATIN)基因的研究进展 | 第15-17页 |
| 1、MSTN基因的起源 | 第15页 |
| 2、MSTN基因结构 | 第15-16页 |
| 3、MSTN基因的表达 | 第16页 |
| 4、MSTN基因功能及研究意义 | 第16-17页 |
| 5、MSTN的应用前景 | 第17页 |
| 第二节 基因组定点编辑技术-----CRISPR/Cas9 | 第17-21页 |
| 1、CRISPR的研究历史 | 第18页 |
| 2、CRISPR的分类 | 第18页 |
| 3、CRISPR/Cas的基因座结构 | 第18-19页 |
| 4、CRISPR/Cas的作用机制 | 第19-20页 |
| 5、CRISPR/Cas的应用前景 | 第20-21页 |
| 第三节 基因组定点编辑技术-----TALEN | 第21-25页 |
| 1、TALEN研究历史 | 第21-22页 |
| 2、TALEN结构 | 第22页 |
| 3、TALEN作用机制 | 第22-24页 |
| ·TALEN的识别 | 第23页 |
| ·TALEN的切割和修复 | 第23-24页 |
| 4、TALEN技术的展望 | 第24-25页 |
| 第二章 试验研究 | 第25-58页 |
| 试验一MSTN基因靶点确定及Cas9和TALEN质粒构建 | 第25-30页 |
| 摘要 | 第25页 |
| 1、材料与方法 | 第25-28页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第25页 |
| ·CRISPR/Cas9和TALENs作用靶点确定 | 第25页 |
| ·Cas9质粒和TALENs质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·CRISPR/Cas9和TALEN质粒转化 | 第27页 |
| ·CRISPR/Cas9和TALENs去内毒素质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2、结果与分析 | 第28页 |
| 3、讨论 | 第28-29页 |
| 4、结论 | 第29-30页 |
| 试验二 绵羊成纤维细胞电转染效率优化 | 第30-37页 |
| 摘要 | 第30页 |
| 1、材料和方法 | 第30-33页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·细胞和质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-32页 |
| ·绵羊成纤维细胞的培养 | 第31页 |
| ·质粒制备 | 第31页 |
| ·电转液的配制 | 第31页 |
| ·电转染细胞和流式细胞仪检测 | 第31-32页 |
| ·试验设计 | 第32-33页 |
| ·电转程序对转染效果的影响 | 第32页 |
| ·细胞数量对转染效果的影响 | 第32页 |
| ·质粒浓度对转染效率的影响 | 第32页 |
| ·不同的电击次数对转染效率的影响 | 第32页 |
| ·电转后不同的放置温度对转染效率的影响 | 第32-33页 |
| ·不同细胞类型的转染效率 | 第33页 |
| 2、结果与分析 | 第33-35页 |
| ·电转程序对转染效率的影响 | 第33页 |
| ·细胞数量对电转效果的影响 | 第33-34页 |
| ·质粒浓度对转染效率的影响 | 第34页 |
| ·不同的电击次数对转染效果的影响 | 第34-35页 |
| ·电转后不同的放置温度对转染效率的影响 | 第35页 |
| ·不同类型的细胞转染效率的比较 | 第35页 |
| 3、讨论 | 第35-36页 |
| 4、结论 | 第36-37页 |
| 试验三CRISPR/Cas9和TALENs质粒活性检测 | 第37-49页 |
| 摘要 | 第37页 |
| 1 材料和方法 | 第37-43页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·萨福克绵羊成纤维细胞电转染及细胞基因组获得 | 第38页 |
| ·电转染细胞 | 第38页 |
| ·电转染绵羊基因组的获得 | 第38页 |
| ·Cas9和TALEN靶点周边DNA序列扩增及纯化 | 第38-39页 |
| ·Surveyor nuclease酶S酶切PCR纯化产物 | 第39-41页 |
| ·T7EI处理PCR胶回收产物 | 第41-42页 |
| ·PAGE检测Surveyor nuclease和T7EI酶的消化结果 | 第42页 |
| ·HRM检测 | 第42-43页 |
| 2、结果与分析 | 第43-46页 |
| ·绵羊成纤维细胞电转染的结果 | 第43页 |
| ·PCR产物纯化结果 | 第43-44页 |
| ·Surveyor nuclease和T7EI酶切的结果 | 第44-46页 |
| ·HRM检测结果 | 第46页 |
| 3、讨论 | 第46-48页 |
| 4、结论 | 第48-49页 |
| 试验四 绵羊MSTN基因突变单克隆细胞筛选 | 第49-58页 |
| 摘要 | 第49页 |
| 1、材料和方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·突变细胞系的获得 | 第49-50页 |
| ·阳性单克隆细胞的鉴定 | 第50-53页 |
| ·HRM鉴定 | 第50页 |
| ·PAGE检测突变 | 第50-52页 |
| ·测序 | 第52-53页 |
| 2、结果与分析 | 第53-56页 |
| ·HRM检测结果 | 第53-54页 |
| ·PAGE检测结果 | 第54-55页 |
| ·测序结果 | 第55-56页 |
| ·测序结果序列比对 | 第55-56页 |
| ·测序结果蛋白比对 | 第56页 |
| 3、讨论 | 第56-57页 |
| 4、结论 | 第57-58页 |
| 全文结论 | 第58页 |
| 创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 附件 | 第72页 |
