| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写对照 | 第9-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| ·SPLUNC1研究进展 | 第14-18页 |
| ·SPLUNC1基因的基本信息 | 第14页 |
| ·SPLUNC1蛋白结构与分布 | 第14-15页 |
| ·SPLUNC1的生物学功能 | 第15-17页 |
| ·SPLUNC1在疾病上中的作用 | 第17-18页 |
| ·SPLUNC1在钠离子通道蛋白(ENaC)中的作用 | 第18页 |
| ·其他 | 第18页 |
| ·RACE技术研究进展 | 第18-21页 |
| ·RACE技术的原理 | 第18-20页 |
| ·RACE技术的研究现状 | 第20-21页 |
| ·生物信息学研究进展 | 第21-22页 |
| ·真核生物表达系统研究进展 | 第22-23页 |
| ·蛋白质分离纯化技术研究进展 | 第23-24页 |
| ·Western Blotting技术研究进展 | 第24-25页 |
| ·展望 | 第25-26页 |
| 第二章 巴什拜羊、湖羊SPLUNC1基因全长cDNA序列的扩增 | 第26-37页 |
| 摘要 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·菌种及载体 | 第27页 |
| ·实验试剂 | 第27页 |
| ·实验仪器 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| ·巴什拜羊、湖羊总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·反转录获得cDNA与简并引物扩增 | 第29页 |
| ·3’RACE扩增 | 第29-30页 |
| ·5’RACE扩增 | 第30-31页 |
| ·3’RACE和 5’RACE产物的测序 | 第31-32页 |
| ·RACE结果拼接及BLAST比对 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-35页 |
| ·湖羊、巴什拜羊总RNA提取 | 第32-33页 |
| ·湖羊、巴什拜羊反转录cDNA的简并引物扩增 | 第33页 |
| ·湖羊、巴什拜羊SPLUNC1的 3’RACE产物检测 | 第33-34页 |
| ·湖羊、巴什拜羊SPLUNC1的 5’RACE产物检测 | 第34-35页 |
| ·RACE结果拼接及BLAST比对 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·有关RACE技术引物的改进 | 第35-36页 |
| ·湖羊、巴什拜羊SPLUNC1基因序列与感染绵羊肺炎支原体的分析 | 第36-37页 |
| 第三章 巴什拜羊、湖羊SPLUNC1 CDNA全长的生物信息学分析 | 第37-48页 |
| 摘要 | 第37页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-47页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1核酸序列基本组成分析 | 第39页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1序列开放阅读框分析 | 第39-42页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1氨基酸序列分析 | 第42-43页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1氨基酸序列疏水性性分析 | 第43页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白信号肽、亚细胞定位及跨膜区域分析 . 313.3.6 巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白二级结构预测分析 | 第43-45页 |
| ·巴什拜羊、湖羊 SPLUNC1 蛋白二级结构预测分析 | 第45页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白三级结构预测分析 | 第45-46页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白保守区域预测 | 第46页 |
| ·巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的系统发育树分析 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 巴什拜羊、湖羊SPLUNC1基因的克隆与真核表达 | 第48-62页 |
| 摘要 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·菌种与载体 | 第49页 |
| ·实验试剂 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·引物设计与合成 | 第50页 |
| ·重组毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-SPLUNC1的构建 | 第50-52页 |
| ·pPIC9K-SPLUNC1重组表达载体转化毕赤酵母 | 第52-54页 |
| ·重组酵母菌的筛选与鉴定 | 第54页 |
| ·重组SPLUNC1在酵母中的诱导表达与鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组SPLUNC1的Western Blotting鉴定 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·SPLUNC1基因的PCR扩增结果 | 第56页 |
| ·pPIC9K-SPLUNC1重组表达质粒的双酶切鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·重组酵母菌的表现型鉴定和基因型鉴定 | 第57-58页 |
| ·酵母工程菌的诱导表达检测 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 重组巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的纯化及生物活性检测 | 第62-69页 |
| 摘要 | 第62-63页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·菌株 | 第63页 |
| ·引物 | 第63页 |
| ·实验试剂 | 第63-64页 |
| ·实验仪器 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·重组巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的诱导表达 | 第64页 |
| ·重组巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| ·重组巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的生物活性检测 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-67页 |
| ·重组巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的纯化 | 第66-67页 |
| ·重组巴什拜羊、湖羊SPLUNC1蛋白的生物活性研究 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 全文总结 | 第69页 |
| 创新点 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录 1：实验试剂配制 | 第78-80页 |
| 附录 2： GenBank数据库中湖羊、巴什拜羊SPLUNC1基因序列信息 | 第80-84页 |
| 附录 3：湖羊、巴什拜羊核苷酸比对结果 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简介 | 第87-88页 |
| 附件 | 第88页 |
