| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·蛋白酶及其分类 | 第10页 |
| ·低温蛋白酶的生理生化特征 | 第10-11页 |
| ·低温蛋白酶的结构特点 | 第11页 |
| ·低温蛋白酶的应用 | 第11-13页 |
| ·洗涤行业 | 第11-12页 |
| ·食品工业 | 第12页 |
| ·纺织工业 | 第12页 |
| ·皮革脱毛 | 第12-13页 |
| ·生物治理 | 第13页 |
| ·多肽合成 | 第13页 |
| ·在分子生物学中的应用 | 第13页 |
| ·低温蛋白酶的研究进展 | 第13-18页 |
| ·低温蛋白酶的来源 | 第13-15页 |
| ·低温蛋白酶的生产 | 第15-17页 |
| ·微生物生产低温蛋白酶的分离纯化 | 第17-18页 |
| ·低温蛋白酶的晶体结构解析 | 第18页 |
| ·本课题的立题依据、研究内容及主要技术路线 | 第18-21页 |
| ·本课题的立题依据 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株及样品来源 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·引物 | 第21-23页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第23-26页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·实验试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液与缓冲液 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·产低温蛋白酶菌株的分离纯化 | 第26页 |
| ·细菌的革兰氏染色 | 第26页 |
| ·细菌的生理生化实验 | 第26页 |
| ·Planococcus sp.基因组的提取 | 第26-27页 |
| ·菌株16S rRNA基因序列的克隆和序列分析 | 第27页 |
| ·DNA片段的产物回收 | 第27-28页 |
| ·感受态的制备及转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的基因的测序和分析 | 第30页 |
| ·低温蛋白酶的发酵 | 第30页 |
| ·酶活的测定 | 第30-33页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| ·酶学性质研究 | 第33页 |
| ·蛋白酶基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·保守区序列的克隆 | 第33-34页 |
| ·通过反向PCR(Reverse PCR)获得目的全长基因 | 第34-35页 |
| ·cpls8与cpls41基因的的序列分析 | 第35页 |
| ·cpls8基因在E coli Rosseta(DE3)中的表达 | 第35-37页 |
| ·cpls8重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pET-22b-cpls8在E coil Rosseta(DE3)的异源表达 | 第36页 |
| ·CPLS8酶的分离纯化 | 第36-37页 |
| ·重组酶CPLS8酶学性质的研究 | 第37页 |
| ·重组酶的比酶活的测定 | 第37页 |
| ·cpls41在E coli Rosseta(DE3)中的表达 | 第37-38页 |
| ·cpls41基因重组质粒的构建方法 | 第38页 |
| ·重组质粒的蛋白表达 | 第38页 |
| ·重组蛋白酶的的分离纯化 | 第38页 |
| ·cpls 41蛋白酶基因在Bacillus subtilis WB600中的表达 | 第38-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-64页 |
| ·产低温蛋白酶菌株的筛选鉴定 | 第39-43页 |
| ·低温培养条件下产蛋白酶菌株的筛选 | 第39页 |
| ·菌种的鉴定 | 第39-40页 |
| ·温度和pH值对菌株11815产酶的影响 | 第40-41页 |
| ·菌株11815所产蛋白酶的酶学性质分析 | 第41-43页 |
| ·低温蛋白酶编码基因的克隆和序列分析 | 第43-53页 |
| ·蛋白酶基因的保守区的确定 | 第43页 |
| ·反向PCR,获得全长基因 | 第43-47页 |
| ·cpls8基因及其所编码蛋白酶的序列分析 | 第47-50页 |
| ·cpls41基因及其所编码蛋白酶的序列分析 | 第50-53页 |
| ·CPLS8在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析 | 第53-59页 |
| ·cpls8在E coli Rosseta(DE3)中的表达 | 第53-55页 |
| ·CPLS8蛋白酶分离纯化及SDS-PAGE电泳检测 | 第55-56页 |
| ·重组酶CPLS8酶学性质的研究 | 第56-59页 |
| ·cpls41蛋白酶基因的表达 | 第59-64页 |
| ·cpls41在E coil BL21(DE3)、E coil Rosseta(DE3)中的表达 | 第59-62页 |
| ·cpls41基因在Bacillus subtilis WB600中的表达 | 第62-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-74页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文 | 第74-75页 |
| 8 致谢 | 第75页 |
