| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-13页 |
| Abstract | 第13-20页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 研究背景和立题依据 | 第22-50页 |
| ·研究背景 | 第22-46页 |
| ·褐藻酸 | 第22-29页 |
| ·褐藻酸的来源与结构 | 第22-24页 |
| ·褐藻酸的性质 | 第24-26页 |
| ·褐藻寡糖的生物活性 | 第26-27页 |
| ·褐藻酸的应用 | 第27-29页 |
| ·褐藻酸裂解酶 | 第29-46页 |
| ·褐藻酸裂解酶的分类 | 第30-35页 |
| ·褐藻酸裂解酶的来源 | 第35-37页 |
| ·褐藻酸裂解酶的基因工程研究研究进展 | 第37页 |
| ·褐藻酸裂解酶的结构分析 | 第37-42页 |
| ·褐藻酸裂解酶的与底物的结合识别机制 | 第42-43页 |
| ·褐藻酸裂解酶的催化机制 | 第43-44页 |
| ·褐藻酸裂解酶的应用 | 第44-46页 |
| ·立题依据与研究内容 | 第46-50页 |
| ·立题依据 | 第46-47页 |
| ·研究内容 | 第47-50页 |
| 第二章 北极海带样品褐藻酸裂解酶产生菌株的筛选与多样性分析 | 第50-66页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-56页 |
| ·环境样品及菌株与质粒 | 第51页 |
| ·主要生化试剂、分子试剂和试剂盒 | 第51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51-52页 |
| ·数据库及分析软件 | 第52页 |
| ·培养基配制 | 第52-53页 |
| ·海带样品的采集 | 第53页 |
| ·菌株的筛选 | 第53页 |
| ·菌株的16S rRNA基因的克隆测序 | 第53-54页 |
| ·16S rRNA基因序列分析 | 第54页 |
| ·褐藻酸裂解酶酶活测定方法 | 第54-55页 |
| ·菌株的最适生长温度、最适产酶温度以及其所产酶最适作用温度的测定 | 第55-56页 |
| ·菌株的最大产酶能力 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-63页 |
| ·采样地点信息以及可培养菌株筛选结果 | 第56-57页 |
| ·北极海带附着可培养菌株的多样性以及系统发育分析 | 第57-58页 |
| ·16S rRNA基因的扩增和测序 | 第57-58页 |
| ·北极海带附着可培养菌株的系统发育分析 | 第58页 |
| ·北极海带附着可培养产褐藻酸裂解酶菌株的多样性以及系统发育分析 | 第58-60页 |
| ·可培养产胞外褐藻酸裂解酶菌株多样性分析 | 第58-60页 |
| ·可培养产胞外褐藻酸裂解酶菌株的系统发育分析 | 第60页 |
| ·菌株的产酶条件和产酶能力分析 | 第60-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 第三章 PL7家族褐藻酸裂解酶ALY SJ01的酶学性质和底物特异性机制研究 | 第66-94页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·材料与方法 | 第66-76页 |
| ·菌株与质粒 | 第66-67页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第67-68页 |
| ·主要仪器设备 | 第68页 |
| ·数据库及分析软件 | 第68页 |
| ·培养基配制 | 第68页 |
| ·表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·E.coli BL21(DE3)异源表达aly SJ01基因 | 第69-70页 |
| ·重组酶的诱导表达与纯化 | 第70-71页 |
| ·aly SJ01重组酶性质研究 | 第71-72页 |
| ·aly SJ01酶解产物分析 | 第72-73页 |
| ·突变体的构建 | 第73-75页 |
| ·突变体的表达和纯化 | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-92页 |
| ·序列比对分析 | 第76-78页 |
| ·aly SJ01表达载体的构建 | 第78页 |
| ·aly SJ01的诱导表达和纯化 | 第78-80页 |
| ·aly SJ01蛋白的酶学性质 | 第80-86页 |
| ·酶催化的最适温度和pH | 第80-81页 |
| ·aly SJ01的热稳定性 | 第81-82页 |
| ·离子对酶活的影响 | 第82-83页 |
| ·NaCl对aly SJ01活性的影响 | 第83-84页 |
| ·aly SJ01的催化动力学参数 | 第84-85页 |
| ·aly SJ01底物特异性分析 | 第85页 |
| ·酶解产物的TLC分析 | 第85-86页 |
| ·aly SJ01降解底物特异性的机制研究 | 第86-92页 |
| ·序列比对分析和突变位点设计 | 第86-88页 |
| ·突变体的表达和纯化 | 第88页 |
| ·突变体对不同底物降解活性的测定 | 第88-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| 第四章 ALY SJ02的成熟机制及其N端结构域功能的研究 | 第94-118页 |
| ·引言 | 第94页 |
| ·材料与方法 | 第94-102页 |
| ·菌株和质粒 | 第94-95页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第95页 |
| ·主要仪器设备 | 第95-96页 |
| ·数据库及分析软件 | 第96页 |
| ·培养基的配制 | 第96页 |
| ·表达载体的构建 | 第96-97页 |
| ·蛋白的诱导表达和纯化 | 第97-99页 |
| ·N端结构域多糖吸附试验 | 第99-100页 |
| ·N端结构域与催化结构域的共表达试验 | 第100-101页 |
| ·aly SJ02的酶活测定 | 第101页 |
| ·蛋白晶体的培养及优化 | 第101页 |
| ·晶体衍射数据收集 | 第101-102页 |
| ·衍射数据的处理 | 第102页 |
| ·aly SJ02成熟酶的同源模建 | 第102页 |
| ·结果与分析 | 第102-116页 |
| ·aly SJ02序列分析和比对 | 第102-105页 |
| ·aly SJ02 N端结构域的吸附功能分析 | 第105-107页 |
| ·N端结构域蛋白在aly SJ02折叠过程中的作用分析 | 第107-109页 |
| ·蛋白结晶及数据收集 | 第109-110页 |
| ·aly SJ02的蛋白结构解析及修正 | 第110页 |
| ·aly SJ02的结构模型质量分析 | 第110-112页 |
| ·aly SJ02 precursor和CD的整体结构模型 | 第112-114页 |
| ·比较不同来源的aly SJ02催化结构域结构差异 | 第114-116页 |
| ·讨论 | 第116-118页 |
| 第五章 PL18家族褐藻酸裂解酶ALY SJ02的底物识别和催化机制研究 | 第118-136页 |
| ·引言 | 第118-119页 |
| ·材料与方法 | 第119-122页 |
| ·菌株和质粒 | 第119页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第119页 |
| ·主要仪器设备 | 第119页 |
| ·数据库及分析软件 | 第119页 |
| ·培养基的配制 | 第119页 |
| ·aly SJ02晶体Lid-loop分子动力学模拟 | 第119-120页 |
| ·Aly SJ02晶体与褐藻酸4聚寡糖共模拟 | 第120页 |
| ·Aly SJ02突变体的构建 | 第120-122页 |
| ·突变体的纯化与生化性质研究 | 第122页 |
| ·结果与分析 | 第122-133页 |
| ·aly SJ02分子中的钙离子的功能分析 | 第122-123页 |
| ·盖子结构在催化过程中的作用 | 第123-125页 |
| ·底物与酶的docking模型及aly SJ02的底物识别机制 | 第125-127页 |
| ·突变验证和分析关键氨基酸在底物识别和催化中的作用 | 第127-129页 |
| ·催化机制 | 第129-131页 |
| ·褐藻酸裂解海的结构对比以及进化分析 | 第131-133页 |
| ·讨论 | 第133-136页 |
| 全文总结和课题展望 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-146页 |
| 在读期间发表的学术论文以及获奖情况 | 第146-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 附录 | 第149-160页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第160页 |
