| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-19页 |
| 缩略语表 | 第19-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-46页 |
| 1 前言 | 第20-21页 |
| 2 猪脂肪组织沉积 | 第21-23页 |
| ·猪脂肪组织沉积部位的分布 | 第21-22页 |
| ·皮下脂肪与肌内脂肪的比较 | 第22-23页 |
| 3 脂肪细胞生成 | 第23-30页 |
| ·动物体内脂肪细胞的来源 | 第23-24页 |
| ·脂肪生成过程 | 第24-25页 |
| ·调控脂肪分化的主要信号通路 | 第25-26页 |
| ·调控脂肪分化的主要转录因子 | 第26-30页 |
| ·转录因子在脂肪分化过程中的作用 | 第26页 |
| ·脂肪分化的核心转录因子-PPARγ | 第26-29页 |
| ·脂肪分化的关键转录因子-C/EBPs家族 | 第29-30页 |
| 4 KLFs家族调控脂肪分化的研究进展 | 第30-39页 |
| ·KLFs家族成员的结构和功能 | 第30-31页 |
| ·KLFs在脂肪分化过程中的作用及方式 | 第31-38页 |
| ·促进脂肪分化的KLFs | 第33-36页 |
| ·抑制脂肪分化的KLFs | 第36-38页 |
| ·KLF13研究进展 | 第38-39页 |
| ·KLF13结构及特点 | 第38页 |
| ·KLF13的功能研究 | 第38-39页 |
| 5 从转录水平筛选和鉴定猪脂肪分化过程中重要转录因子 | 第39-44页 |
| ·高通量筛选差异表达基因的技术 | 第40-42页 |
| ·表达谱芯片 | 第40-41页 |
| ·RNA-Seq技术 | 第41-42页 |
| ·从差异表达基因到转录因子 | 第42-43页 |
| ·生物信息学分析和靶定与猪脂肪分化相关的转录因子 | 第43-44页 |
| ·鉴定猪脂肪分化过程中新转录因子的研究策略 | 第44页 |
| 6 课题研究的目的意义 | 第44-46页 |
| 第二章 猪皮下和肌内脂肪前体细胞成脂分化过程中基因表达水平的比较与分析 | 第46-70页 |
| 1 前言 | 第46-47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-51页 |
| ·分离猪皮下脂肪和肌肉中SV细胞 | 第47页 |
| ·皮下脂肪和肌肉内SV细胞的成脂诱导以及样品收集 | 第47-48页 |
| ·总RNA抽提 | 第48页 |
| ·cDNA文库的构建和HiSeq 2000平台的测序 | 第48-49页 |
| ·差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)的筛选 | 第49-50页 |
| ·Q-PCR分析 | 第50页 |
| ·基因的功能注释 | 第50-51页 |
| ·基因表达模式的聚类分析 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-68页 |
| ·Illumina HiSeq2000高通量测序结果的数据统计分析 | 第51-52页 |
| ·注释基因的分析 | 第52-53页 |
| ·在成脂分化过程中比较ASVC和MSVC的基因表达 | 第53-55页 |
| ·Q-PCR验证DEGs的表达 | 第55-56页 |
| ·ASVC和MSVC之间DEGs的功能注释 | 第56-62页 |
| ·ASVC和MSVC之间DEGs在成脂分化中表达模式的聚类分析 | 第62-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| ·比较ASVC和MSVC在成脂分化过程中基因表达水平的差异 | 第68页 |
| ·ASVC和MSVC之间DEGs的功能注释 | 第68-70页 |
| 第三章 猪皮下和肌内脂肪前体细胞成脂分化过程中差异表达基因的筛选与分析 | 第70-85页 |
| 1 前言 | 第70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-72页 |
| ·分离猪皮下脂肪和肌肉中SV细胞 | 第70-71页 |
| ·皮下脂肪和肌肉内SV细胞的成脂诱导以及样品收集 | 第71页 |
| ·总RNA抽提 | 第71页 |
| ·差异表达基因的筛选 | 第71页 |
| ·基因表达模式的聚类分析 | 第71页 |
| ·基因的功能注释 | 第71页 |
| ·转录因子结合位点的分析 | 第71-72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-81页 |
| ·ASVC和MSVC成脂分化过程中DEGs的筛选 | 第72页 |
| ·ASVC和MSVC成脂分化过程中DEGs表达模式的聚类分析 | 第72-74页 |
| ·显著性表达模式中DEGs的功能注释 | 第74-79页 |
| ·ASVC和MSVC成脂分化过程中候选转录因子基因的筛选 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-85页 |
| ·ASVC和MSVC成脂分化过程中的DEGs | 第81页 |
| ·ASVC和MSVC成脂分化过程中DEGs的表达模式聚类分析 | 第81-82页 |
| ·显著性表达模式中DEGs的功能注释 | 第82-83页 |
| ·ASVC和MSVC成脂分化过程中的候选转录因子 | 第83-85页 |
| 第四章 KLF13特异性调控猪脂肪分化的机制 | 第85-126页 |
| 1 前言 | 第85-86页 |
| 2 材料和方法 | 第86-96页 |
| ·试验材料 | 第86页 |
| ·动物、细胞和细菌材料 | 第86页 |
| ·载体和质粒 | 第86页 |
| ·主要仪器、试剂和溶液的配制 | 第86-89页 |
| ·主要仪器 | 第86-87页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第87-88页 |
| ·主要溶液的配制 | 第88-89页 |
| ·试验方法 | 第89-96页 |
| ·猪脂肪和肌肉SV细胞的分离同第二章2.1 | 第89页 |
| ·猪成熟脂肪细胞的分离和DFAT细胞的获得 | 第89-90页 |
| ·成脂诱导的方式 | 第90页 |
| ·油红O染色 | 第90页 |
| ·总RNA抽提及反转录 | 第90-91页 |
| ·基因组DNA的抽提 | 第91页 |
| ·基因的克隆和表达质粒的构建 | 第91页 |
| ·Real-time PCR | 第91-93页 |
| ·Western Blot | 第93-94页 |
| ·启动子的突变和删除 | 第94-95页 |
| ·细胞转染 | 第95页 |
| ·双荧光素酶活性检测 | 第95页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第95-96页 |
| ·统计分析 | 第96页 |
| 3 结果与分析 | 第96-122页 |
| ·KLF13对猪脂肪SV细胞成脂分化的影响 | 第96-101页 |
| ·KLF13在猪脂肪SV细胞成脂分化过程中的表达模式 | 第96-97页 |
| ·siRNA干涉KLF13的表达对猪脂肪SV细胞成脂分化的影响 | 第97-99页 |
| ·超表达KLF13对猪脂肪SV细胞成脂分化的影响 | 第99-101页 |
| ·KLF13对猪肌肉SV细胞成脂分化的影响 | 第101-103页 |
| ·KLF13在猪肌肉SV细胞成脂分化过程中的表达模式 | 第101-102页 |
| ·干涉KLF13对猪肌肉SV细胞成脂分化的影响 | 第102-103页 |
| ·KLF13对猪DFAT细胞成脂分化的影响 | 第103-105页 |
| ·KLF13在猪DFAT细胞成脂分化过程中的表达模式 | 第103-104页 |
| ·干涉KLF13对猪DFAT细胞成脂分化的影响 | 第104-105页 |
| ·KLF13调控猪脂肪分化所介导的靶基因的筛选 | 第105-112页 |
| ·干涉KLF13对猪脂肪SV细胞成脂分化关键基因表达的影响 | 第105-106页 |
| ·超表达KLF13对猪脂肪SV细胞成脂分化关键基因表达的影响 | 第106-107页 |
| ·在成脂诱导条件下干涉KLF13对猪脂肪SV细胞成脂分化关键基因表达的影响 | 第107-108页 |
| ·在成脂诱导条件下超表达KLF13对猪脂肪SV细胞成脂分化关键基因表达的影响 | 第108-109页 |
| ·在成脂诱导条件下干涉KLF13对猪DFAT细胞成脂分化关键基因表达的影响 | 第109-110页 |
| ·候选靶基因启动子上KLF13结合位点的预测 | 第110-111页 |
| ·在成脂诱导条件下干涉和超表达KLF13对猪脂肪SV细胞PPARγ蛋白水平的影响 | 第111-112页 |
| ·KLF13调控猪脂肪分化的机制 | 第112-115页 |
| ·KLF13对截短的猪源PPARγ启动子活性的影响 | 第112-113页 |
| ·KLF13对突变和删除KLF13结合位点的PPARγ启动子活性的影响 | 第113-114页 |
| ·ChIP试验验证KLF13与猪源PPARγ启动子的结合 | 第114-115页 |
| ·KLF13对鼠脂肪分化的影响 | 第115-122页 |
| ·KLF13对鼠源前脂肪细胞系3T3-L1成脂分化过程中的表达模式 | 第115-116页 |
| ·干涉KLF13对鼠源前脂肪细胞系3T3-L1成脂分化的影响 | 第116-117页 |
| ·在成脂诱导条件下干涉KLF13对鼠成脂分化关键基因表达的影响 | 第117-119页 |
| ·在成脂诱导条件下超表达KLF13对鼠成脂分化关键基因表达的影响 | 第119-121页 |
| ·KLF13对鼠源PPARγ2启动子活性的影响 | 第121-122页 |
| 4 讨论 | 第122-126页 |
| ·KLF13可以影响猪脂肪前体细胞成脂分化 | 第122-123页 |
| ·KLF13通过PPARγ介导来影响猪脂肪分化 | 第123-124页 |
| ·KLF13调控猪和鼠脂肪分化存在种属特异性 | 第124-126页 |
| 第五章 结语 | 第126-127页 |
| 1 研究结论 | 第126页 |
| 2 创新点 | 第126页 |
| 3 本研究不足之处 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-141页 |
| 研究生在读期间发表论文 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142页 |
