| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 缩略语表 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-59页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 脂肪细胞的来源、分类和组织分布 | 第20-24页 |
| ·脂肪细胞的来源 | 第20-21页 |
| ·脂肪细胞的分类和组织分布 | 第21-24页 |
| ·白色脂肪细胞 | 第21-22页 |
| ·棕色脂肪细胞 | 第22-23页 |
| ·米色脂肪细胞 | 第23-24页 |
| 3 脂肪生成的分子调控 | 第24-37页 |
| ·分化：从前脂肪细胞到成熟脂肪细胞 | 第24-28页 |
| ·定型：从多能干细胞到前脂肪细胞 | 第28-37页 |
| ·成脂定型过程的关键信号 | 第28-35页 |
| ·成脂定型过程的关键转录因子 | 第35-36页 |
| ·参与调控成脂定型的miRNA | 第36-37页 |
| 4 组蛋白乙酰化酶在白色脂肪细胞脂肪生成中的作用 | 第37-41页 |
| ·GNAT家族 | 第39-40页 |
| ·MYST家族 | 第40页 |
| ·核受体共激活子 | 第40-41页 |
| ·其他组蛋白乙酰化酶 | 第41页 |
| 5 组蛋白去乙酰化酶在白色脂肪细胞脂肪生成中的作用 | 第41-48页 |
| ·锌依赖的组蛋白去乙酰化酶 | 第43-45页 |
| ·NAD~+依赖组蛋白去乙酰化酶家族 | 第45-48页 |
| ·SIRT1 | 第45-47页 |
| ·SIRT2 | 第47页 |
| ·SIRT3 | 第47页 |
| ·SIRT4和SIRT5 | 第47-48页 |
| ·SIRT6和SIRT7 | 第48页 |
| 6 组蛋白乙酰化酶/组蛋白去乙酰化酶对棕色脂肪细胞分化的调控 | 第48-50页 |
| ·核受体共激活子 | 第49页 |
| ·HDAC3 | 第49页 |
| ·Sirtuins | 第49-50页 |
| 7 活体研究SIRT1的生物学和生理功能 | 第50-57页 |
| ·基因敲除动物模型研究 | 第50-51页 |
| ·SIRT1敲除模型建立的方法 | 第51页 |
| ·SIRT1与衰老和应激 | 第51-53页 |
| ·SIRT1与发育 | 第53-54页 |
| ·SIRT1与代谢 | 第54-56页 |
| ·SIRT1与胰岛素敏感性 | 第56-57页 |
| 8 研究假设与研究目的意义 | 第57-59页 |
| 第二章 SIRT1调控Wnt信号通路影响间充质干细胞成脂定向的机制 | 第59-106页 |
| 1 前言 | 第59-60页 |
| 2 材料和方法 | 第60-74页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·细胞材料 | 第60页 |
| ·载体和质粒 | 第60页 |
| ·菌株 | 第60-61页 |
| ·主要仪器、试剂和配制 | 第61-63页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第61-62页 |
| ·主要溶液的配制 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-74页 |
| ·细胞培养 | 第63-64页 |
| ·油红O染色 | 第64-65页 |
| ·细胞周期检测 | 第65页 |
| ·总RNA抽提及反转录 | 第65-66页 |
| ·Real-time PCR | 第66-67页 |
| ·基因的克隆和表达质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·干涉质粒的构建 | 第68页 |
| ·细胞转染 | 第68-69页 |
| ·慢病毒包装 | 第69-70页 |
| ·慢病毒颗粒感染目的细胞 | 第70-71页 |
| ·Wnt信号通路PCR芯片 | 第71页 |
| ·细胞或组织总蛋白抽提及Western blotting检测 | 第71-73页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第73页 |
| ·免疫共沉淀 | 第73-74页 |
| ·双荧光素酶活性检测 | 第74页 |
| ·统计分析 | 第74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-101页 |
| ·添加白藜芦醇/烟酰胺对C3H10T1/2细胞成脂定型与分化的影响 | 第74-82页 |
| ·对脂肪生成表型的影响 | 第74-77页 |
| ·对细胞周期的影响 | 第77-79页 |
| ·对成脂标志基因mRNA和蛋白表达的影响 | 第79-82页 |
| ·RNA干涉/过表达SIRT1对MSCs细胞成脂定型与分化的影响 | 第82-85页 |
| ·对脂肪生成表型的影响 | 第82-83页 |
| ·对成脂标志基因mRNA和蛋白表达的影响 | 第83-85页 |
| ·SIRT1是否通过调控Wnt信号通路影响间充质干细胞的成脂定向 | 第85-88页 |
| ·构建SIRT1的siRNA质粒及干涉效果检测 | 第85-86页 |
| ·干涉SIRT1对Wnt信号的靶基因和关键蛋白β-catenin蛋白表达的影响 | 第86-87页 |
| ·干涉SIRT1对Wnt信号通路报告系统活性的影响 | 第87页 |
| ·瞬时转染β-catenin突变体质粒对Wnt信号的影响 | 第87-88页 |
| ·筛选受SIRT1调控的Wnt信号拮抗物亚型 | 第88-91页 |
| ·运用Real-time PCR芯片筛选受SIRT1调控的Wnt信号拮抗物 | 第88-89页 |
| ·验证Real-time PCR芯片结果 | 第89-90页 |
| ·验证SIRT1对Wnt信号拮抗物亚型mRNA表达的影响 | 第90-91页 |
| ·SIRT1调控Wnt信号拮抗物对间充质干细胞成脂定向的影响 | 第91-101页 |
| ·Wnt拮抗物在不同细胞成脂分化过程的表达模式 | 第91-92页 |
| ·筛选干涉sFRP1,sFRP2和Dact1的稳转细胞 | 第92-93页 |
| ·干涉Wnt信号拮抗物对C3H10T1/2细胞成脂定向的影响 | 第93-95页 |
| ·干涉Wnt信号拮抗物对Wnt信号报告系统活性的影响 | 第95-96页 |
| ·SIRT1对Wnt信号拮抗物启动子区域乙酰化的影响 | 第96-99页 |
| ·SIRT1对β-catenin乙酰化的影响 | 第99-101页 |
| 4 讨论 | 第101-106页 |
| ·SIRT1对脂肪生成的影响 | 第101-102页 |
| ·SIRT1对细胞周期的调控 | 第102-103页 |
| ·SIRT1对Wnt信号通路的影响 | 第103-106页 |
| 第三章 活体研究SIRT1对脂肪生成的影响 | 第106-130页 |
| 1 前言 | 第106-107页 |
| 2 材料和方法 | 第107-112页 |
| ·实验材料 | 第107页 |
| ·细胞材料 | 第107页 |
| ·实验动物 | 第107页 |
| ·主要仪器、试剂和配制 | 第107-108页 |
| ·主要仪器 | 第107页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第107页 |
| ·主要溶液的配制 | 第107-108页 |
| ·实验方法 | 第108-112页 |
| ·小鼠和胚胎基因型鉴定 | 第108页 |
| ·小鼠组织取样 | 第108-109页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞的分离和培养 | 第109-110页 |
| ·油红O染色 | 第110页 |
| ·基因组DNA的抽提 | 第110-111页 |
| ·总RNA抽提及反转录 | 第111页 |
| ·Real-time PCR | 第111页 |
| ·细胞或组织总蛋白抽提及Western-blot检测 | 第111页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第111页 |
| ·免疫共沉淀 | 第111页 |
| ·小鼠血液甘油三酯检测 | 第111页 |
| ·脂肪组织HE染色 | 第111页 |
| ·统计分析 | 第111-112页 |
| 3 结果与分析 | 第112-127页 |
| ·SIRT1基因敲除小鼠基因型的鉴定 | 第112页 |
| ·不同SIRT1基因型小鼠的体重,脂肪组织和血液甘油三酯含量的差异 | 第112-116页 |
| ·小鼠的外观表型 | 第112-113页 |
| ·小鼠的体重 | 第113-114页 |
| ·小鼠的脂肪组织质量 | 第114-116页 |
| ·小鼠的血液甘油三酯的含量 | 第116页 |
| ·不同SIRT1基因型小鼠的脂肪组织形态差异 | 第116-117页 |
| ·不同SIRT1基因型的小鼠的脂肪组织成脂标志基因的表达研究 | 第117-118页 |
| ·不同SIRT1基因型的MEFs细胞的成脂定向研究 | 第118-121页 |
| ·MEFs细胞的鉴定 | 第118-119页 |
| ·MEFs细胞的成脂定向的表型 | 第119页 |
| ·MEFs细胞成脂定向的成脂标志基因的表达 | 第119-121页 |
| ·在MEFs中SIRT1对Wnt信号拮抗物启动子区域组蛋白乙酰化的影响 | 第121-125页 |
| ·SIRT1对sFRP1的修饰 | 第122-123页 |
| ·SIRT1对sFRP2的修饰 | 第123-124页 |
| ·SIRT1对Dact1的修饰 | 第124-125页 |
| ·在MEFs中SIRT1对β-catenin乙酰化的影响 | 第125-127页 |
| 4 讨论 | 第127-130页 |
| 第四章 结语 | 第130-131页 |
| 1 研究结论 | 第130页 |
| 2 创新点 | 第130页 |
| 3 本研究不足之处 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-159页 |
| 附录Ⅰ | 第159-161页 |
| 附录Ⅱ | 第161-162页 |
| 研究生期间发表的主要论文 | 第161-162页 |
| 致谢 | 第162页 |
