| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 中英文缩写对照表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-40页 |
| 1 引言 | 第16页 |
| 2 脂肪生成概述 | 第16-27页 |
| ·脂肪生成过程 | 第16-18页 |
| ·调控脂肪生成的重要转录因子 | 第18-22页 |
| ·PPAR家族 | 第18-20页 |
| ·C/EBPs家族 | 第20-22页 |
| ·TGFβ信号通路与脂肪生成 | 第22-25页 |
| ·Wnt信号通路与脂肪生成 | 第25-27页 |
| 3 脂质代谢 | 第27-30页 |
| ·脂肪酸的β-氧化 | 第27-29页 |
| ·脂肪酸的活化 | 第28页 |
| ·脂酰CoA进入线粒体 | 第28页 |
| ·脂肪酸的β-氧化 | 第28-29页 |
| ·脂肪酸碳链的延长 | 第29-30页 |
| 4 miRNA调控脂肪细胞分化和脂质代谢 | 第30-37页 |
| ·miRNA的生物合成和作用机制 | 第31-32页 |
| ·miRNA主要检测方法 | 第32-34页 |
| ·传统的克隆方法 | 第32页 |
| ·Northern blotting杂交 | 第32-33页 |
| ·miRNA芯片 | 第33页 |
| ·Q-PCR(real time quantitative PCR) | 第33页 |
| ·高通量测序 | 第33-34页 |
| ·miRNA调控脂肪细胞分化 | 第34-36页 |
| ·miRNA促进脂肪细胞分化 | 第34-35页 |
| ·miRNA抑制脂肪细胞分化 | 第35-36页 |
| ·miRNA调控脂质代谢 | 第36-37页 |
| 5 问题的提出及课题的目的与意义 | 第37-40页 |
| 第二章 miR-224对脂肪细胞分化和脂肪酸代谢的作用研究 | 第40-72页 |
| 1 材料与方法 | 第40-59页 |
| ·载体和菌株 | 第40页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| ·主要溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·细胞培养及诱导分化 | 第42-43页 |
| ·细胞的复苏 | 第42页 |
| ·细胞的常规培养 | 第42-43页 |
| ·细胞冻存 | 第43页 |
| ·3T3-L1细胞的诱导分化 | 第43页 |
| ·细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第43-44页 |
| ·细胞的转染 | 第43-44页 |
| ·荧光素酶相对活性的检测 | 第44页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·Q-PCR分析 | 第45-49页 |
| ·miRNA的定量分析 | 第45-47页 |
| ·基因的定量分析 | 第47-49页 |
| ·油红O染色 | 第49页 |
| ·甘油三酯和游离脂肪酸含量测定 | 第49-50页 |
| ·靶基因预测以及预测靶基因3'UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第50-55页 |
| ·靶基因预测 | 第50页 |
| ·预测靶基因3'UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第50-55页 |
| ·靶基因的鉴定 | 第55-56页 |
| ·Western blotting分析 | 第56-58页 |
| ·蛋白提取 | 第56-57页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第57页 |
| ·转膜 | 第57-58页 |
| ·抗原抗体免疫反应 | 第58页 |
| ·抗体 | 第58页 |
| ·主要数据库及分析软件 | 第58-59页 |
| ·统计学分析 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-72页 |
| ·miR-224序列保守性分析 | 第59页 |
| ·miR-224-5p的表达谱分析 | 第59-60页 |
| ·miR-224-5p抑制小鼠3T3-L1前脂肪细胞的分化 | 第60-61页 |
| ·miR-224靶基因的鉴定 | 第61-64页 |
| ·miR-224-5p在脂肪细胞分化早期抑制脂肪细胞的分化 | 第64-66页 |
| ·miR-224-5p调节脂肪酸代谢 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-72页 |
| ·miR-224的序列分析和表达谱分析 | 第68-69页 |
| ·miR-224调控脂肪细胞分化 | 第69-70页 |
| ·miR-224调控脂肪酸代谢 | 第70-72页 |
| 第三章 miR-146b在脂肪细胞分化过程中的作用研究 | 第72-83页 |
| 1 材料与方法 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-83页 |
| ·miR-146b序列保守性分析 | 第72页 |
| ·miR-146b-5p的表达谱分析 | 第72-73页 |
| ·miR-146b-5p促进3T3-L1前脂肪细胞的分化 | 第73-74页 |
| ·miR-146b靶基因的鉴定 | 第74-77页 |
| ·miR-146-5p通过靶向Runx1t1和Smad4促进脂肪细胞的分化 | 第77-80页 |
| ·讨论 | 第80-83页 |
| ·miR-146b的序列分析 | 第80-81页 |
| ·miR-146b调控脂肪细胞分化 | 第81-83页 |
| 第四章 miR-215在脂肪细胞分化过程中的作用研究 | 第83-92页 |
| 1 材料与方法 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-92页 |
| ·miR-215序列保守性分析 | 第83页 |
| ·miR-215-5p抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化 | 第83-85页 |
| ·miR-215靶基因的鉴定 | 第85-87页 |
| ·miR-215-5p通过靶向FNDC3B和CTNNBIP1抑制脂肪细胞的分化 | 第87-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| ·miR-215的序列分析 | 第90页 |
| ·miR-215调控脂肪细胞分化 | 第90-92页 |
| 第五章 miR-135a调控脂肪酸碳链的延长 | 第92-97页 |
| 1 材料与方法 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-97页 |
| ·miR-135a序列保守性分析 | 第92页 |
| ·miR-135a靶基因的鉴定 | 第92-96页 |
| ·讨论 | 第96-97页 |
| 第六章 讨论 | 第97-104页 |
| 1 miRNA的保守性 | 第97-98页 |
| 2 miRNA靶基因预测 | 第98-99页 |
| 3 miRNA调控脂肪生成和脂质代谢 | 第99-102页 |
| 4 主要创新点 | 第102页 |
| 5 不足之处 | 第102-103页 |
| 6 下一步工作计划 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-123页 |
| 附录Ⅰ | 第123-134页 |
| 研究生在读期间发表的主要论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
