| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 英文縮略词中英文注释表 | 第12-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-32页 |
| ·GITR概述 | 第17-25页 |
| ·GITR/GITRL的发现及其所属家族 | 第17页 |
| ·小鼠GITR/GITRL的染色体定位与蛋白质结构 | 第17-18页 |
| ·小鼠GITR与GITRL基因组 | 第18-19页 |
| ·GITR与GITRL的分布 | 第19页 |
| ·GITR与GITRL的相互作用模式 | 第19-21页 |
| ·GITR/GITRL在免疫系统中的作用及有关信号通路 | 第21-23页 |
| ·GITR在相关疾病中的研究及临床应用前景 | 第23-25页 |
| ·CD4~+T细胞 | 第25-28页 |
| ·Treg细胞 | 第26-27页 |
| ·Th17细胞 | 第27页 |
| ·其他CD4~+T细胞 | 第27-28页 |
| ·自身免疫性甲状腺炎 | 第28-30页 |
| ·自身免疫性甲状腺炎简介 | 第28-29页 |
| ·自身免疫性甲状腺炎相关细胞因子 | 第29-30页 |
| ·自身免疫性甲状腺炎相关疾病模型 | 第30页 |
| ·本论文研究的目的、方法、意义和实验方案的设计 | 第30-32页 |
| ·研究目的 | 第30页 |
| ·研究方法及技术 | 第30-31页 |
| ·研究意义 | 第31页 |
| ·实验方案的设计 | 第31-32页 |
| 第二章 小鼠GITR基因克隆及序列分析 | 第32-45页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要溶液配制 | 第34页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-39页 |
| ·大肠埃希菌DH5α感受态的制备 | 第34-35页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞的分离 | 第35页 |
| ·总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·RNA反转录合成cDNA | 第36页 |
| ·引物设计和合成 | 第36页 |
| ·PCR扩增小鼠GITR基因 | 第36-37页 |
| ·胶回收纯化PCR产物 | 第37-38页 |
| ·连接反应 | 第38页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态并进行阳性克隆筛选 | 第38-39页 |
| ·测序结果的比对 | 第39页 |
| ·小鼠GITR蛋白氨基酸序列生物信息学分析 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·小鼠GITR基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·pMD18-T-mGITR的测序结果的比对 | 第40-41页 |
| ·小鼠GITR蛋白氨基酸序列生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 原核表达质粒pET32a-mGITR胞外段和pET32a-mGITR胞外段-mIgGFc构建 | 第45-60页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要溶液 | 第45页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-50页 |
| ·小鼠GITR胞外段基因的T-A克隆 | 第46-47页 |
| ·小鼠IgGFc基因的T-A克隆 | 第47-48页 |
| ·阳性克隆菌重组质粒的提取及保存 | 第48页 |
| ·原核表达载体pET32a(+)空载体的扩增 | 第48页 |
| ·空载体与目的片段的酶切和连接 | 第48-50页 |
| ·结果 | 第50-57页 |
| ·各目的基因克隆至T载体后PCR验证的结果 | 第50-51页 |
| ·各目的基因克隆至T载体后测序结果 | 第51-53页 |
| ·目的基因连接至表达载体后PCR及酶切验证结果 | 第53-55页 |
| ·目的基因连接至表达载体后测序结果 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 mGITR胞外段及mGITR胞外段-Fc融合蛋白的原核表达及相关功能的初步研究 | 第60-85页 |
| ·材料 | 第60-64页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要溶液 | 第62-63页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-70页 |
| ·大肠埃希菌Rosetta感受态的制备 | 第64页 |
| ·重组质粒pET32a-mGITR胞外段、pET32a-mGITR胞外段-mIgGFc和pET32a(+)空载体分别转化Rosetta感受态 | 第64页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第64页 |
| ·蛋白诱导条件的优化 | 第64-65页 |
| ·目的蛋白的纯化和鉴定 | 第65-66页 |
| ·目的蛋白的透析 | 第66页 |
| ·目的蛋白溶液内毒素的去除 | 第66-67页 |
| ·目的蛋白浓度的过滤除菌、浓度测定及保存 | 第67页 |
| ·目的蛋白的功能研究 | 第67-69页 |
| ·流式细胞术观察mGITR-Fc融合蛋白体外对树突状细胞表面GITRL表达的影响 | 第69-70页 |
| ·统计学分析 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-82页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定结果 | 第70-71页 |
| ·目的蛋白诱导最优条件的确定 | 第71-76页 |
| ·SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定纯化后目的蛋白 | 第76-78页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测纯化后的抗-CD3抗体 | 第78页 |
| ·CD4+T细胞增殖结果 | 第78-81页 |
| ·mGITR-Fc融合蛋白体外对树突状细胞表面GITRL表达的影响 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 mGITR-Fc蛋白对实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠模型干预作用及其机制的研究 | 第85-104页 |
| ·材料 | 第85-87页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·主要试剂 | 第85-86页 |
| ·主要溶液 | 第86-87页 |
| ·动物模型 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-93页 |
| ·小鼠甲状腺球蛋白(mTg)的提取,纯化和鉴定 | 第87-88页 |
| ·mGITR-Fc融合蛋白及对照蛋白(Fc)的获得 | 第88页 |
| ·小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型的建立及mGITR-Fc融合蛋白干预 | 第88-89页 |
| ·血清收集及mTg抗体检测 | 第89-90页 |
| ·甲状腺组织收集,切片及苏木素-伊红(HE)染色 | 第90页 |
| ·流式细胞术检测小鼠脾脏和小鼠颈部淋巴结中相关细胞 | 第90-93页 |
| ·统计学分析 | 第93页 |
| ·结果 | 第93-102页 |
| ·mTg鉴定 | 第93-94页 |
| ·HE染色分析EAT模型的病理改变和mGITR-Fc融合蛋白对病变程度的影响 | 第94-95页 |
| ·EAT模型鼠血清mTg抗体的水平及mGITR-Fc融合蛋白对其的影响 | 第95-96页 |
| ·mGITR-Fc融合蛋白对小鼠颈部淋巴结免疫细胞的影响 | 第96-99页 |
| ·mGITR-Fc融合蛋白对小鼠脾脏中免疫细胞的影响 | 第99-102页 |
| ·讨论 | 第102-104页 |
| 第六章 主要结论和展望 | 第104-105页 |
| ·主要结论 | 第104页 |
| ·展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-118页 |
| 攻读博士学位期间发表和待发表的学术论文 | 第118-120页 |
| 在读期间主持及参与的科研项目及其它科研成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
