| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| Abbreviations | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·莽草酸的理化性质及在植物界中的分布 | 第13-14页 |
| ·莽草酸的药理作用 | 第14-15页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第14页 |
| ·抗血栓及脑缺血 | 第14-15页 |
| ·抗炎症作用 | 第15页 |
| ·抗禽流感作用 | 第15页 |
| ·莽草酸的制备方法 | 第15-21页 |
| ·从八角茴香中提取莽草酸 | 第15-16页 |
| ·化学合成法 | 第16页 |
| ·微生物合成法 | 第16-21页 |
| ·代谢流量分析 | 第21-31页 |
| ·计量学代谢流量分析方法 | 第22-23页 |
| ·基于同位素标记实验的代谢流量分析方法 | 第23-27页 |
| ·代谢流量比率分析及其在代谢工程中的应用 | 第27-31页 |
| ·本论文研究内容及其意义 | 第31-34页 |
| 第二章 产莽草酸枯草芽孢杆菌莽草酸途径的改造及其发酵条件的优化 | 第34-57页 |
| 前言 | 第34-36页 |
| ·材料与方法 | 第36-43页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·培养基和培养条件 | 第36页 |
| ·DNA操作,基因扩增以及质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·发酵操作过程 | 第38页 |
| ·莽草酸含量测定 | 第38-39页 |
| ·突变株表型验证 | 第39页 |
| ·莽草酸的鉴定：GC-MS分析 | 第39-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-55页 |
| ·GC-MS检测菌株培养液中莽草酸的存在 | 第43-44页 |
| ·突变株表型验证 | 第44-45页 |
| ·突变株突变位点的鉴定 | 第45页 |
| ·突变株莽草酸产量的检测 | 第45页 |
| ·过表达菌株的构建及其莽草酸产量的测定 | 第45-49页 |
| ·组合表达(combinatorial overexpression)菌株的构建及其莽草酸产量的测定 | 第49-50页 |
| ·碳源对B.subtilis BSSA47407生长及莽草酸产量的影响 | 第50-51页 |
| ·初始蔗糖浓度对B.subtilis BSSA47407生长及莽草酸产量的影响 | 第51-53页 |
| ·间隔补料对B.subtilis BSSA47407生长及莽草酸产量的影响 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第55-57页 |
| 第三章 ~(13)C同位素示踪和GC-MS分析揭示产莽草酸枯草芽孢杆菌体内代谢流分布 | 第57-94页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| ·材料与方法 | 第58-67页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第58页 |
| ·菌株和质粒 | 第58页 |
| ·培养基和培养条件 | 第58页 |
| ·生理参数的确定 | 第58-60页 |
| ·GC-MS样品的准备及分析 | 第60-61页 |
| ·LC-MS法测定~(13)C标记实验中莽草酸和3-脱氢莽草酸 | 第61页 |
| ·氨基酸片段MDV(质量同位素分布向量)的计算 | 第61-63页 |
| ·前体(precursor)MDV的计算 | 第63-64页 |
| ·代谢流比率的计算 | 第64-66页 |
| ·枯草代谢流的计算 | 第66页 |
| ·统计分析 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-89页 |
| ·氨基酸片段GC-MS分析 | 第67页 |
| ·莽草酸片段LC-QTOF分析 | 第67-68页 |
| ·基于批式培养的标记系统和(拟)稳态 | 第68-71页 |
| ·生长参数 | 第71-72页 |
| ·氨基酸标记信息 | 第72-73页 |
| ·前体MDV计算结果 | 第73-74页 |
| ·代谢流比率的计算结果 | 第74页 |
| ·1-~(13)C实验结果 | 第74-81页 |
| ·细胞组成成分的前体,辅因子,CO_2需求 | 第81页 |
| ·代谢净流量的计算结果 | 第81-85页 |
| ·两个潜在改造目标的鉴定 | 第85-89页 |
| ·小结与讨论 | 第89-94页 |
| 第四章 产莽草酸枯草芽孢杆菌的进一步代谢改造 | 第94-114页 |
| 前言 | 第94-96页 |
| ·材料与方法 | 第96-103页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第96页 |
| ·菌株和质粒 | 第96页 |
| ·培养基和培养条件 | 第96页 |
| ·DNA操作,基因扩增,质粒以及菌株的构建 | 第96-98页 |
| ·发酵操作过程 | 第98页 |
| ·莽草酸以及脱氢莽草酸含量测定：HPLC法 | 第98页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第98-103页 |
| ·结果与分析 | 第103-112页 |
| ·启动子强度比较 | 第103-105页 |
| ·质粒及菌株的构建 | 第105-106页 |
| ·发酵结果 | 第106-112页 |
| ·小结 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-120页 |
| 发表文章 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
