| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第1章 绪论(基因的从头合成与纠错研究进展) | 第12-46页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·基因合成 | 第13-14页 |
| ·寡核苷酸的合成 | 第14-27页 |
| ·寡核苷酸亚磷酰胺四步化学合成法 | 第14-15页 |
| ·寡核苷酸两步化学合成法 | 第15-17页 |
| ·基于柱子的寡核苷酸合成(Column-based oligos synthesis) | 第17页 |
| ·基于芯片的寡核苷酸合成(Microarray-based oligos synthesis) | 第17-27页 |
| ·寡核苷酸序列的组装 | 第27-32页 |
| ·DNA核酸酶介导的寡核苷酸组装方法 | 第27-29页 |
| ·酿酒酵母体内组装 | 第29-30页 |
| ·芯片合成寡核苷酸的组装 | 第30-32页 |
| ·DNA的合成错误 | 第32-43页 |
| ·纠正DNA合成错误的实际意义 | 第33-34页 |
| ·DNA合成错误的纠正 | 第34-43页 |
| ·总结 | 第43-44页 |
| ·本文开展的研究 | 第44-46页 |
| 第2章 固定化MutS介导的DNA合成错误的纠正及规模化基因从头合成 | 第46-86页 |
| ·实验材料与设备 | 第46-47页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第46-47页 |
| ·酶与试剂 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-86页 |
| ·MICC纠错体系的设计以及构建 | 第48-65页 |
| ·寡核苷酸文库的设计及合成 | 第65-72页 |
| ·寡核苷酸文库的扩增 | 第72-73页 |
| ·寡核苷酸文库序列两端引物序列的移除 | 第73页 |
| ·基因片段的组装 | 第73-75页 |
| ·基因片段两端引物序列的移除 | 第75页 |
| ·全长基因序列的组装 | 第75-77页 |
| ·MICC介导的DNA合成错误的纠正 | 第77-78页 |
| ·MICC纠错体系的优化 | 第78-82页 |
| ·基于MICC的高通量纠错体系的建立 | 第82-86页 |
| 第3章 实验结果 | 第86-110页 |
| ·MutS蛋白的表达及功能验证 | 第86-89页 |
| ·MutS蛋白的表达和纯化 | 第86-87页 |
| ·MutS蛋白的功能验证 | 第87-89页 |
| ·MICC的装配及功能验证 | 第89-92页 |
| ·RAC和MutS的结合常数(Ka)及最大吸附量(Amax) | 第89页 |
| ·MICC的装配 | 第89-90页 |
| ·MICC的功能验证 | 第90-92页 |
| ·MICC纠错系统的优化——EGFP基因的从头合成及其错误纠正 | 第92-99页 |
| ·芯片合成DNA的错误率 | 第92-93页 |
| ·etMICC纠错系统的优化 | 第93-95页 |
| ·MICC纠错方法的优化 | 第95-99页 |
| ·高通量纠错及基因组装 | 第99-107页 |
| ·高通量纠错策略1及sMMO和Epo基因的组装 | 第99-101页 |
| ·高通量纠错策略2及lycopene基因的组装 | 第101-102页 |
| ·高通量纠错策略3及lycopene基因的组装 | 第102-104页 |
| ·高通量纠错策略4及RFPs突变文库的组装 | 第104-107页 |
| ·基因片段的通量组装 | 第107页 |
| ·Lycopene的合成—合成的番茄红素合成基因的功能验证 | 第107-110页 |
| 第4章 讨论 | 第110-120页 |
| ·MICC纠错体系的优化 | 第110-112页 |
| ·固定化有两种MutS蛋白的etMICC的纠错效率比只固定化有一种MutS的MICC高 | 第110-111页 |
| ·重复MICC纠错循环可以进一步提高合成基因的保真度 | 第111页 |
| ·eMICC和etMICC错误纠正能够显著的提高获得正确合成基因序列的概率 | 第111-112页 |
| ·MICC纠错方法与其他纠错方法的比较 | 第112-114页 |
| ·使用通用引物的意义 | 第114页 |
| ·不同的高通量纠错策略的比较 | 第114-116页 |
| ·MICC纠错体系是经济有效 | 第116页 |
| ·MICC纠错体系是时间有效 | 第116-117页 |
| ·结论 | 第117-118页 |
| ·展望 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-128页 |
| 附录 | 第128-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第136页 |
