| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 香蕉枯萎病的研究进展 | 第10-17页 |
| ·香蕉简介 | 第10-11页 |
| ·香蕉枯萎病 | 第11-12页 |
| ·香蕉枯萎病的发生与危害 | 第11页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌 | 第11-12页 |
| ·病原菌的侵染和发病 | 第12页 |
| ·香蕉枯萎病的分子致病机制研究进展及解螺旋酶的概况 | 第12-13页 |
| ·香蕉枯萎病菌基因功能研究策略 | 第13-14页 |
| ·致病相关基因的研究方法 | 第13页 |
| ·GFP在香蕉枯萎病菌相关致病基因研究中的应用 | 第13-14页 |
| ·选题意义与目标 | 第14-16页 |
| ·本研究的技术路线 | 第16-17页 |
| 下篇 研究内容 | 第17-58页 |
| 1 材料与方法 | 第17-34页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·供试菌株 | 第17页 |
| ·致病测定所用香蕉品种 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要的试剂 | 第17-19页 |
| ·主要的仪器 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-34页 |
| ·致病性严重减弱的T-DNA突变体的获得 | 第19-20页 |
| ·野生型和T-DNA突变体总基因组DNA的提取 | 第20页 |
| ·突变体T-DNA插入的分子检测 | 第20-24页 |
| ·突变体插入位点侧翼序列的克隆和测序 | 第24-26页 |
| ·扩增产物序列分析定位 | 第26页 |
| ·插入失活基因序列生物信息学分析 | 第26页 |
| ·RT-PCR验证基因表达 | 第26-27页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第27-29页 |
| ·香蕉枯萎病菌原生质体制备 | 第29-30页 |
| ·原生质的转化 | 第30页 |
| ·转化子的筛选及纯化 | 第30页 |
| ·香蕉枯萎病菌Focr4-1701插入失活基因敲除转化子的验证 | 第30页 |
| ·香蕉枯萎病菌T-DNA插入失活基因敲除突变体相关表性分析 | 第30-32页 |
| ·通过同源重组及互补定点突变靶基因的中间载体构建 | 第32-33页 |
| ·敲除子菌株Focr4-1701原生质体制备 | 第33页 |
| ·原生质体转化 | 第33页 |
| ·被敲除目的基因的同源重组互补转化子检验及纯化 | 第33页 |
| ·被敲除目的基因的同源重组互补转化子相关表性分析 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-53页 |
| ·T-DNA插入突变体Focr4-1701致病性初步验证结果 | 第34-35页 |
| ·T-DNA插入突变体Focr4-1701活体叶片致病性测定结果 | 第34页 |
| ·香蕉苗根部的致病性测定结果 | 第34-35页 |
| ·Southern杂交分析结果 | 第35-36页 |
| ·插入突变体菌株Focr4-1701插入位点侧翼序列的克隆 | 第36页 |
| ·插入失活基因的定位及其序列分析结果 | 第36-39页 |
| ·插入失活基因的获得 | 第36-38页 |
| ·氨基酸序列分析结果 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR法验证 | 第39-41页 |
| ·香蕉枯萎病菌插入失活基因敲除载体的构建和筛选 | 第41-43页 |
| ·香蕉枯萎病菌插入失活基因敲除突变体PCR法验证 | 第41页 |
| ·香蕉枯萎病菌插入失活基因敲除转化子Southern杂交法验证 | 第41-43页 |
| ·敲除转化子菌株的遗传互补实验 | 第43页 |
| ·插入突变基因互补载体的构建 | 第43页 |
| ·互补转化子的筛选、纯化及验证 | 第43页 |
| ·突变体对潮霉素B敏感性测定 | 第43-45页 |
| ·基因敲除突变体及其互补转化子致病性检测结果 | 第45-47页 |
| ·活体叶片致病性测定结果 | 第45页 |
| ·香蕉苗根部的致病性测定结果 | 第45-47页 |
| ·玻璃纸穿透测定的结果 | 第47页 |
| ·孢子形态及产孢量测定结果 | 第47页 |
| ·细胞壁降解酶降解细胞壁测定结果 | 第47-48页 |
| ·菌丝体产粗毒素的测定 | 第48-49页 |
| ·菌落形态观察 | 第49-50页 |
| ·碳源对突变体及敲除子生长影响测定的结果 | 第50页 |
| ·pH对突变体及敲除子生长影响测定的结果 | 第50页 |
| ·生长温度对突变体及敲除子生长的影响测定的结果 | 第50-51页 |
| ·在寄主体内细胞壁降解酶活性的测定 | 第51-52页 |
| ·香蕉枯萎病菌T-DNA插入失活基因敲除突变体耐盐情况 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| ·预测基因的RT-PCR验证及该基因相关的信息学分析 | 第53-54页 |
| ·检测尖孢镰孢菌致病性的方法 | 第54页 |
| ·PEG介导转化过程中应注意的问题 | 第54-55页 |
| ·酶及毒素的测定 | 第55-56页 |
| 4 问题与展望 | 第56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 论文发表情况 | 第66页 |
