| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 一、前言 | 第7-12页 |
| 1 G 蛋白偶联受体异源二聚化 | 第7-8页 |
| ·GPCRs 的二聚化现象 | 第7页 |
| ·GPCRs 异源二聚体的信号特点 | 第7-8页 |
| ·GPCRs 异源二聚化的病理生理学功能 | 第8页 |
| 2 APJ 和 B1R 系统 | 第8-10页 |
| 3 时空动态检测蛋白质-蛋白质相互作用 | 第10页 |
| 4 课题的目的意义及设计思路 | 第10-12页 |
| 二、材料和方法 | 第12-28页 |
| 1 实验材料 | 第12-17页 |
| ·质粒、细胞和菌株 | 第12页 |
| ·抗体 | 第12页 |
| ·生化试剂及试剂盒 | 第12-13页 |
| ·主要试剂的制备 | 第13-16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-28页 |
| ·表达载体的构建及表达 | 第17-23页 |
| ·HEK293 细胞的培养 | 第23页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第23-24页 |
| ·检测 B1R 与 APJ 之间的相互作用 | 第24-26页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 CRE、NFAT、SRE | 第26-27页 |
| ·Western blot 检测 eNOS 的磷酸化 | 第27-28页 |
| 三、结果 | 第28-40页 |
| 1 表达载体的构建及表达 | 第28-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第28-31页 |
| ·验证载体的表达 | 第31-32页 |
| 2 HEK293 细胞的培养 | 第32-33页 |
| 3 HEK293 细胞的转染 | 第33页 |
| 4 B1R 与 APJ 之间的相互作用 | 第33-36页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜检测 B1R 与 APJ 的共定位 | 第33-34页 |
| ·生物发光共振能量转移检测 B1R 和 APJ 之间的相互作用 | 第34-36页 |
| 5 双荧光素酶报告基因检测 CRE、NFAT、SRE | 第36-38页 |
| 6 Western blot 检测 eNOS 磷酸化 | 第38-40页 |
| ·HUVECs 的培养 | 第38页 |
| ·shRNA APJ 转染 HUVECs | 第38-39页 |
| ·Western blot 检测 eNOS 磷酸化 | 第39-40页 |
| 四、讨论 | 第40-42页 |
| 1 APJ/B1R 的异源二聚化 | 第40页 |
| 2 APJ/B1R 二聚化对信号转导途径的影响 | 第40-42页 |
| 五、结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 中英文符号对照表 | 第46-47页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
