| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-21页 |
| ·酵母中 bfr1 的多药抗药性研究进展 | 第9-15页 |
| ·ABC 转运蛋白的结构 | 第9-10页 |
| ·酿酒酵母中 ABC 转运蛋白的分类 | 第10-11页 |
| ·酵母中的 PDR 基因功能 | 第11-14页 |
| ·酵母中 bfr1 的耐药性研究 | 第14-15页 |
| ·抗咖啡碱的酵母菌株的筛选 | 第15-16页 |
| ·PCR 介导的随机突变和定点突变 | 第16-21页 |
| ·突变的原理及特点 | 第17-18页 |
| ·在筛选突变体的应用 | 第18-21页 |
| 2 引言 | 第21-23页 |
| ·研究内容及意义 | 第21-22页 |
| ·研究路线 | 第22页 |
| ·课题来源 | 第22-23页 |
| 3 材料及方法 | 第23-33页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·试剂，药品及仪器 | 第23-24页 |
| ·试剂与药品 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-33页 |
| ·野生型 bfr1 酵母表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·bfr1 基因突变文库的建立 | 第25-26页 |
| ·随机突变 bfr1 基因的真核表达 | 第26-27页 |
| ·bfr1 基因的定点突变 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌 Top10 感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·小剂量大肠杆菌质粒提取 | 第28-29页 |
| ·酵母质粒提取 | 第29-30页 |
| ·引物合成 | 第30页 |
| ·DNA 序列测序与比对 | 第30页 |
| ·酵母对咖啡碱的抗性 | 第30-31页 |
| ·酵母 SD-His 液体培养基中咖啡碱含量的 HPLC 检测 | 第31-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-45页 |
| ·野生型 INVSc1 对咖啡碱的抗性 | 第33-34页 |
| ·bfr1 基因转化酵母对咖啡碱的抗性 | 第34-36页 |
| ·bfr1 基因的酵母表达载体构建与转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆对咖啡碱的抗性 | 第35-36页 |
| ·突变 bfr1 基因文库的建立与筛选 | 第36-37页 |
| ·突变株的鉴定与蛋白结构分析 | 第37-41页 |
| ·突变株的鉴定 | 第37-39页 |
| ·突变株的蛋白质结构分析 | 第39-41页 |
| ·定点突变筛选突变体 | 第41-42页 |
| ·mut-pAG413-bfr1-B 突变菌株对其它毒素的抗性 | 第42-45页 |
| 5 讨论 | 第45-48页 |
| ·bfr1 随机突变文库构建 | 第45-46页 |
| ·野生型 bfr1 和突变 bfr1 的在酵母中表达 | 第46页 |
| ·利用定点突变技术筛选耐受咖啡碱的酵母菌株 | 第46-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
