| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-19页 |
| 一、植原体及其生物学特性 | 第9-11页 |
| 二、植原体的危害与检测防治技术研究现状 | 第11-15页 |
| 三、植原体相关蛋白的研究现状 | 第15-17页 |
| 四、大肠杆菌原核表达系统在蛋白研究上的应用 | 第17-19页 |
| 1 引言 | 第19-21页 |
| ·本研究的实用价值和理论意义 | 第19页 |
| ·国内外研究现状 | 第19-20页 |
| ·本研究拟解决的问题 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·质粒、菌种和实验动物 | 第21页 |
| ·主要生化试剂和试剂盒 | 第21页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·主要使用的仪器 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-31页 |
| ·植原体免疫主导膜蛋白 Imp 表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·重组菌诱导表达鉴定及目的蛋白可溶性分析 | 第24-25页 |
| ·Imp 融合蛋白在大肠杆菌中表达条件优化 | 第25-27页 |
| ·Ni-NTA 树脂亲和层析纯化 Imp 蛋白 | 第27-29页 |
| ·Imp 融合蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-45页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·植原体膜蛋白基因 imp 的 PCR 扩增 | 第31页 |
| ·重组表达载体 pET-28a(+)-imp 的构建和鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组菌诱导表达鉴定及目的蛋白可溶性分析 | 第32-36页 |
| ·目的蛋白理化特性分析 | 第32-34页 |
| ·诱导表达 SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第34页 |
| ·Western blotting 鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白可溶性分析 | 第35-36页 |
| ·Imp 在大肠杆菌中表达条件优化 | 第36-41页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第36页 |
| ·重组菌培养条件优化 | 第36-38页 |
| ·目的蛋白诱导表达条件优化 | 第38-40页 |
| ·融合蛋白表达量分析 | 第40-41页 |
| ·Ni-NTA 树脂亲和层析纯化 Imp 蛋白 | 第41-43页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·Imp 浓缩浓度及纯度测定 | 第43页 |
| ·Imp 融合蛋白多克隆抗体鉴定 | 第43-45页 |
| ·ELISA 法分析多克隆抗体效价 | 第43-44页 |
| ·Imp 的多克隆抗体 Western Blotting 检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| ·表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·表达条件的优化 | 第46页 |
| ·融合蛋白亲和层析纯化 | 第46-47页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
| 在读期间参与发表的学术论文 | 第61页 |