| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 1 序言 | 第13-29页 |
| ·疟原虫 | 第13-17页 |
| ·疟原虫分类学地位及亚种 | 第13页 |
| ·疟原虫的生活史 | 第13-15页 |
| ·疟原虫在人体内的发育 | 第13-15页 |
| ·疟原虫在按蚊体内的发育 | 第15页 |
| ·疟原虫的致病性 | 第15-16页 |
| ·疟疾防治 | 第16-17页 |
| ·蚊媒防治 | 第16页 |
| ·化学药物防治 | 第16页 |
| ·疟疾疫苗防治 | 第16-17页 |
| ·疟疾疫苗 | 第17-26页 |
| ·疟疾疫苗的主要类别 | 第17页 |
| ·疟疾疫苗研究进展 | 第17-24页 |
| ·抗红前期原虫疫苗 | 第17-20页 |
| ·抗红内期原虫疫苗 | 第20-21页 |
| ·传播阻断疫苗 | 第21-22页 |
| ·复合多价亚单位疫苗 | 第22-23页 |
| ·疟疾核酸疫苗 | 第23-24页 |
| ·疟疾疫苗研发面临的困难 | 第24-25页 |
| ·疟原虫抗原变异及多途径入侵 | 第24页 |
| ·疟原虫候选抗原多,保护性不强,免疫原性复杂 | 第24-25页 |
| ·难以产生足够的高水平抗体和缺乏持久的免疫力 | 第25页 |
| ·缺乏有效的动物模型和佐剂 | 第25页 |
| ·疟疾疫苗研发未来展望 | 第25-26页 |
| ·本课题研究的基本思路 | 第26-27页 |
| ·本课题研究的技术路线 | 第27-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-62页 |
| ·材料 | 第29-40页 |
| ·质粒载体、菌种、细胞和疟原虫株 | 第29页 |
| ·实验动物和媒介昆虫 | 第29页 |
| ·试剂、材料及试剂盒 | 第29-30页 |
| ·试剂配制 | 第30-37页 |
| ·实验仪器和设备 | 第37-39页 |
| ·分析软件 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-62页 |
| ·伯氏疟原虫BLC转基因重组打靶质粒的构建 | 第40-51页 |
| ·质粒载体的选择 | 第40-41页 |
| ·小鼠目的基因序列及引物设计 | 第41页 |
| ·BALB/c小鼠脾脏组织中提取总RNA | 第41页 |
| ·目的基因片段的体外RT-PCR扩增和产物鉴定 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR产物cDNA的纯化 | 第42-43页 |
| ·cDNA片段的回收 | 第43页 |
| ·质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·质粒载体的去磷酸化 | 第44-45页 |
| ·感受态细胞的制备(Cacl_2法) | 第45页 |
| ·质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第45页 |
| ·双酶切和连接反应构建BLC转基因重组质粒 | 第45-47页 |
| ·重组打靶转基因质粒的鉴定 | 第47页 |
| ·重组pUIS3~-/BLC~+质粒真核(COS-1细胞株)表达BLC及其功能鉴定 | 第47-51页 |
| ·伯氏疟原虫培养和疟原虫子孢子提取 | 第51-53页 |
| ·伯氏疟原虫短期培养 | 第51页 |
| ·伯氏疟原虫子孢子的分离 | 第51-52页 |
| ·疟原虫感染的检测 | 第52页 |
| ·伯氏疟原虫冻存保种和接种 | 第52页 |
| ·按蚊常规饲养及传代 | 第52-53页 |
| ·基因打靶UIS3~-/BLC~+全虫疫苗的构建、筛选和鉴定 | 第53-56页 |
| ·重组转染质粒的线性化 | 第53-54页 |
| ·伯氏疟原虫电穿孔转化 | 第54页 |
| ·伯氏疟原虫转化子的药物筛选 | 第54-55页 |
| ·伯氏疟原虫转化子鉴定 | 第55-56页 |
| ·UIS3~-/BLC~+全虫疫苗抗疟机理分析 | 第56-62页 |
| ·基因敲除疟原虫的表型及活性测定 | 第56-58页 |
| ·动物实验检测免疫反应类型和水平 | 第58-62页 |
| 3 结果 | 第62-79页 |
| ·RT-PCR扩增BLC基因CDNA序列结果 | 第62页 |
| ·重组质粒的构建、鉴定及序列分析 | 第62-64页 |
| ·重组pUIS3~-/BLC~+质粒真核表达BLC及其功能鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组pUIS3~-/BLC~+质粒真核表达BLC蛋白鉴定 | 第65-66页 |
| ·BLC趋化活性检测 | 第66页 |
| ·伯氏疟原虫培养和疟原虫子孢子提取技术平台的建立 | 第66-67页 |
| ·基因打靶并筛选获得阳性基因敲除疟原虫株 | 第67-71页 |
| ·对筛选到的阳性疟原虫株进行表型及活性测定 | 第71-72页 |
| ·动物实验检测免疫反应类型和水平 | 第72-75页 |
| ·动物实验检测细胞免疫反应水平 | 第75-76页 |
| ·体内抗疟原虫攻击实验 | 第76-79页 |
| 4 讨论 | 第79-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 附录 | 第96-97页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第97-98页 |
| 附件 | 第98-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
