| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-33页 |
| ·植物脯氨酸积累的意义及其与抗逆性之间的关系 | 第18-19页 |
| ·脯氨酸的生物合成途径及其相关的酶 | 第19-22页 |
| ·脯氨酸在微生物中的合成 | 第19-20页 |
| ·脯氨酸在植物体内的合成 | 第20-22页 |
| ·脯氨酸生物合成的相关酶基因克隆及其表达特性 | 第22-25页 |
| ·脯氨酸生物合成的相关酶基因遗传转化及其抗逆性研究 | 第25-27页 |
| ·甘蔗抗旱生产与脯氨酸积累的研究进展 | 第27-29页 |
| ·甘蔗其它抗旱相关基因的研究进展 | 第29-31页 |
| ·海藻糖(trehalose)生物合成的相关基因 | 第29-30页 |
| ·甜菜碱(Glycinebetaine)生物合成的相关基因 | 第30-31页 |
| ·其它相关的基因 | 第31页 |
| ·本研究的目的意义 | 第31-33页 |
| 第二章 聚乙二醇胁迫对甘蔗生长前期叶中脯氨酸积累及其代谢关键酶活性的影响 | 第33-40页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·供试材料 | 第33页 |
| ·材料种植与胁迫处理 | 第33-34页 |
| ·测定方法 | 第34-36页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第34页 |
| ·△~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(△~1-pyrroline-5-carboxylate synthetase,P5CS)酶活性的测定 | 第34-35页 |
| ·鸟氨酸转氨酶(ornithine-δ-aminotransferase,δ-OAT)酶活性的测定 | 第35页 |
| ·脯氨酸脱氢酶(proline dehydrogenase,ProDH)酶活性的测定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中游离脯氨酸含量的影响 | 第36页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中P5CS酶活性的影响 | 第36-37页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中δ-OAT酶活性的影响 | 第37页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中ProDH酶活性的影响 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 聚乙二醇胁迫对甘蔗伸长期间叶中脯氨酸积累及其代谢关键酶活性的影响 | 第40-44页 |
| ·材料与方法 | 第40-41页 |
| ·供试材料 | 第40页 |
| ·试验种植与胁迫处理 | 第40页 |
| ·测定方法 | 第40-41页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第41页 |
| ·Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)酶活性的测定 | 第41页 |
| ·鸟氨酸转氨酶(δ-OAT)酶活性的测定 | 第41页 |
| ·脯氨酸脱氢酶(ProDH)酶活性的测定 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中游离脯氨酸积累的影响 | 第41页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中P5CS酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中δ-OAT酶活性的影响 | 第42-43页 |
| ·PEG胁迫对不同品种甘蔗叶中ProDH酶活性的影响 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因组DNA片段的克隆及其序列分析 | 第44-57页 |
| ·材料与方法 | 第44-50页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·所用菌种及试剂 | 第44页 |
| ·溶液、缓冲液与试剂配制 | 第44-45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·甘蔗叶片总DNA的小量提取及纯化 | 第46-47页 |
| ·P5CS基因组DNA片段的PCR扩增反应 | 第47页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第47-48页 |
| ·目的DNA片段的连接转化测序 | 第48-50页 |
| ·目的DNA片段与pMD-18 T-Vector的连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(JM109)的制备 | 第48-49页 |
| ·连接产物的转化 | 第49页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取及纯化 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第50页 |
| ·序列分析 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·甘蔗叶片总DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·甘蔗P5CS基因组DNA片段(ScP5CS)的扩增 | 第51页 |
| ·甘蔗ScP5CS DNA片段的序列分析 | 第51-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因编码区cDNA序列的克隆及其序列分析 | 第57-71页 |
| ·材料与方法 | 第57-61页 |
| ·植物材料 | 第57页 |
| ·所用菌种及试剂 | 第57页 |
| ·引物设计 | 第57-58页 |
| ·甘蔗叶片总RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·甘蔗cDNA第一链的合成 | 第59页 |
| ·甘蔗ScP5CS cDNA片段的PCR扩增反应 | 第59-61页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第61页 |
| ·目的DNA片段的连接转化测序 | 第61页 |
| ·目的DNA片段与pMD-18 T-Vector的连接 | 第61页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(JM109)的制备 | 第61页 |
| ·连接产物的转化 | 第61页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取及纯化 | 第61页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第61页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第61页 |
| ·序列分析 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-69页 |
| ·甘蔗叶片总RNA提取及其cDNA第一链的合成 | 第61-62页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因的编码区cDNA克隆 | 第62页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因核苷酸序列分析 | 第62-65页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因推断氨基酸序列分析 | 第65-69页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因推断氨基酸序列与禾本科植物P5CS基因的氨基酸序列同源性分析 | 第65-69页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因氨基酸序列保守域分析 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因反义表达载体的构建及其遗传转化 | 第71-90页 |
| ·材料与方法 | 第71-82页 |
| ·所用植物材料、菌种及载体 | 第71页 |
| ·所用酶类及试剂 | 第71-72页 |
| ·溶液、缓冲液、试剂及抗生素配制 | 第72-73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·ScP5CS基因片段的扩增和鉴定 | 第73-74页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第74页 |
| ·目的DNA片段的连接转化测序 | 第74-75页 |
| ·目的DNA片段与pMD-18 T-Vector的连接 | 第74页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(JM109)的制备 | 第74页 |
| ·连接产物的转化 | 第74页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取及纯化 | 第74-75页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第75页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第75页 |
| ·反义植物表达载体的构建 | 第75-78页 |
| ·质粒大量提取与纯化 | 第75-76页 |
| ·ScP5CS基因片段的大量酶切与回收 | 第76-77页 |
| ·pBI121的大量酶切与回收 | 第77页 |
| ·载体与Sc-PCS_1,Sc-PCS_2基因的连接与转化 | 第77-78页 |
| ·重组质粒的提取纯化及鉴定 | 第78页 |
| ·表达载体向根癌农杆菌的转化 | 第78-80页 |
| ·根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第78-79页 |
| ·植物表达载体pBI121/Sc-PCS_1,pBI121/Sc-PCS_2转化根癌农杆菌EHA105 | 第79页 |
| ·含pBI121/Sc-PCS_1,pBI121/Sc-PCS_2质粒的农杆菌工程菌的筛选与鉴定 | 第79-80页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化和转基因烟草植株再生 | 第80-81页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第80页 |
| ·根癌农杆菌侵染液的制备 | 第80页 |
| ·根癌农杆菌介导转化烟草和转基因烟草植株再生 | 第80-81页 |
| ·转基因烟草植株的检测 | 第81-82页 |
| ·PCR扩增鉴定 | 第81-82页 |
| ·转基因烟草的胁迫处理检测 | 第82页 |
| ·结果与分析 | 第82-88页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因片段的扩增及其鉴定 | 第82页 |
| ·甘蔗ScP5CS基因片段反义植物表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·重组质粒pBI121/ScP5CS的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第83-84页 |
| ·重组质粒pBI121/Sc-PCS_1,pBI121/Sc-PCS_2导入根癌农杆菌EHA105 | 第84-85页 |
| ·转基因烟草植株的获得及其检测 | 第85-88页 |
| ·转基因烟草植株的遗传转化及植株再生 | 第85页 |
| ·转基因烟草植株的PCR检测 | 第85-87页 |
| ·转基因烟草的胁迫处理检测 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| 第七章 结论与研究展望 | 第90-94页 |
| ·结论 | 第90-92页 |
| ·PEG胁迫对甘蔗生长前期与伸长期叶片脯氨酸积累及其代谢关键酶的影响 | 第90页 |
| ·甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因组DNA片段的克隆 | 第90-91页 |
| ·甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因编码区cDNA序列的克隆 | 第91页 |
| ·甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因反义植物表达载体的构建及其遗传转化 | 第91-92页 |
| ·研究展望 | 第92页 |
| ·后续的研究工作 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第107页 |
